大鼠急性肺栓塞后SMP-30表达下降及其对细胞凋亡的影响.pdfVIP

维普资讯 生国痘理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(3)：439—442 · 439 · [文章编号] 1000—4718(2008)03—0439—40 大鼠急性肺栓塞后 SMP一30表达下降及 其对细胞凋亡的影响 李圣青， 遣新宇， 简 文， 刘阿茹， 赵 峰 ， 欧阳海峰 (第四军医大学西京医院呼吸科，陕西 西安 710033) [摘 要] 目的：研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中衰老标记蛋白质 30(SMP一30)的表达变化及其对 Fas 诱导的细胞凋亡的影响。方法：建立大鼠急性肺栓塞模型，分别在急性肺栓塞后l、8、24和48h进行支气管肺泡 灌洗，然后开胸取出肺组织。常规提取肺组织的总RNA和总蛋白，以正常组为对照，采取半定量RT—PCR的方法 研究SMP一30在mRNA水平表达的变化 ；采用Westernblotting方法进一步验证SMP一30在蛋白水平表达的变化； 采用免疫组织化学方法检测大鼠肺组织中SMP一30以及肺泡巨噬细胞中IL一8在肺栓塞前后表达的变化及其组 织分布情况；采用TUNEL法研究急性肺栓塞后组织细胞的凋亡情况；最后采用ELISA法检测急性肺栓塞后肺泡灌 洗液中sFasL的浓度变化。结果：在大鼠急性肺栓塞后的不同时点 ，SMP一30的mRNA水平和蛋白水平均逐渐降 低，在24和48h下降最为明显。免疫组化研究表明SMP一30主要分布在支气管黏膜上皮细胞和肺泡上皮细胞 ， 急性肺栓塞后SMP一30在上述细胞内的表达均明显降低。TUNEL染色发现随着 SMP一30表达的降低，肺组织内 出现明显的细胞凋亡现象 ，同时肺泡灌洗液中sFasL的浓度升高，肺泡巨噬细胞内IL一8的表达也明显升高。结 论：大鼠急性肺栓塞后肺组织内SMP一30的表达明显降低，可能促进Fas—FasL细胞凋亡系统的活化。 [关键词] 肺栓塞；sFasL；细胞凋亡；衰老标记蛋白质30 [中图分类号] R563．5 [文献标识码] A Down—regulationofSM P 一30anditseffectson theFas—mediatedap． optosisin thelungtissuesafteracutePE LISheng—qing，TIXin—yu，JIANWen，UUA—m ，ZHAOFeng，OUYANGHai—feng (DepartmentofRespiratoryMedicine， 凡gHospital，FourthMilitaryMedcialUniversity，Xi’an710032，China．E— mail：shengqingli@gnmil．com) [ABSTRACT] AIM：Tostudytheexpressionchangesofsenescencemarkerprotein一30(SMP一30)inthelung tissuesofratacutepulmonaryembolism (PE)modelanditseffectsontheFas—mediatedapoptosis．MErHoDS：Arat acutePEmodelwasconstructed．Thesamplesofbmnchoalveolralavagefluid(BALF)nadlungtissueswerecollectedsue． cessivelyatdifferenttimepointsoflh．8h．24hnad48h．Th enormalratswere usedascontro1．Th emRNAlevelchna． gesofSMP一30wereidentifiedbysemi—quantitative RT—PCR．Th e chnagesofSMP一30 proteinwerevalidatedby Western blotting．Th eimmunohistochemical method wasemployedtostudythedistributionnadexpressionchn