复氧时肝细胞活力的影响.pdfVIP

理生理杂志 ChineseJournalofPath~ophysiology 2ol0’26(2；Z二 - 997 · [文章编号] 1000—4718(2010)05—0997—04 组胺对大鼠正常肝细胞及缺氧／复氧时 肝细胞活力的影响 程 楠， 池信锦， 黑子清 ， 甘小亮 (中山大学附属第三医院麻醉科 ，广东 广州 510630) [摘 要] 目的：评价组胺对大鼠正常肝细胞及缺氧／复氧时肝细胞活力的影响。方法：大鼠肝细胞株，调整 细胞密度为 1×10cells／L，接种于培养孔中，每孔200ILL作为研究对象，本研究包括2个实验 ，各实验中研究对象 随机分为7组。实验 1：空 白组和2×10 xIg／L组各 12孔 ，其它各组各6孔，空白组不做任何处理，10 g／L组、 10 L组、10 L组、10 L组 、2×10xIg／L组和5×10xIg／L组分别加人相应浓度的组胺，孵育25h，各组 取6孔，测定肝细胞活力，取空白组和2×10 g／L组的其它6孔，收集细胞培养上清液和细胞 ，分别用于测定谷丙 转氨酶(ALT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性 ，电镜观察细胞超微结构。实验2：分组方法同实验 1，空白组和2× 10 g／L组各l2孔，其它各组各6孔 ，空白组不做任何处理，加入相应浓度的组胺后立即进行缺氧 1h、复氧24h， 各组取6孔，测定肝细胞活力，取空白组和2×10xIg／L的其它6孔 ，收集细胞培养上清液和细胞，分别用于测定 ALT和SOD的活性，电镜观察细胞超微结构。结果：实验 1：与空白组 比较，10 g／L组 一5×10 g／L组肝细胞 活力增加，且呈浓度依赖性，2×10 g／L组SOD活性升高 (P0．05)，ALT活性差异无显著 (P0．05)；电镜下空 白组和2×10xIg／L组肝细胞未见损伤。实验2：与空白组比较，10 L组一5x10 xIg／L组肝细胞活力降低 ，其 中2×10 g／L组和5×10 xIg／L组肝细胞活力降低更明显，2×10xIg／L组 ALT活性升高，SOD活性降低 (P 0．05)，2×10xIg／L肝细胞损伤重于空 白组。结论：组胺可增加大鼠正常肝细胞活力 ，且呈浓度依赖性，2×10 g／，L组胺可提高其抗氧化能力；组胺可降低缺氧／复氧时大鼠肝细胞活力 ，且与浓度有关，2×10 g／L组胺可降 低其抗氧化能力。 [关键词] 组胺 ；肝细胞；细胞存活；细胞低氧 [KEYWORDS] Histamine；Hepatocytes；Cellsurvival；Cellhypoxia [中图分类号] 363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．05．034 组胺是肥大细胞脱颗粒释放的一种胺类物质，在体内分 bromide，MTY，Mbchem]；二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide，DM- 布广，具有广泛的生物学效应 ，有调节机体生理功能与特定 SO，Sigma)；谷丙转氨酶试剂盒(南京建成生物公司)；超氧化 条件下损伤机体的双重特性。有研究表明，大鼠失血性休克 物歧化酶试剂盒 (南京建成生物公司)；二氧化碳培养箱 复苏时肠组织肥大细胞数量增加，组胺释放增加，参与肠缺 (ThermoForlna)；酶联检测仪 (Bio—RadModel680)，Hitachi 血再灌注损伤的病理生理过程 “l2J。肥大细胞存在于肝脏组 H一600透射电镜(日立公司)。 织中，在肝脏的免疫监视 中起着重要作用 。临床上肝移 2 方法 植术和术中阻断肝门时，均不可避免地发生肝脏缺血／再灌 2．1 细胞培养及分组 大鼠肝细胞株 ，复苏后接种于含 注过程。本研究拟通过观察组胺对大鼠正常肝细胞及缺氧／ 10％灭活胎牛血清培养液的培养瓶中，置于37~(2、5％CO2培 复氧时肝细胞活力的影响，探讨在生理状态和缺血再灌注时 养箱中培养。传代培养后，取对数生长期的细胞，用0．25％ 组胺对肝组织的影响。 胰蛋白酶消化后，计数细胞，用DMEM稀释成密度为 1×10