急性缺血性脑梗死大鼠皮层神经蛋白聚糖的表达.pdfVIP

· 2478· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(12)：2478—2480、2496 [文章编号] 1000—4718(2008)12—2478—04 急性缺血性脑梗死大鼠皮层神经蛋白聚糖的表达水 张爱武 ， 方燕南。^， 王雪晶 ， 姜 涛 (’中山大学附属第一医院神经科，广东 广州 510080；南方医科大学华瑞医院神经科 ，广东 广州510630) [摘 要] 目的：研究神经蛋白聚糖 (neurocan)在急性缺血性脑梗死大鼠皮层 内的表达。方法：用电凝法制 成大鼠右侧大脑中动脉梗死模型，在I周、2周和4周不同时期 ，采用免疫组化、实时荧光定量RT—PCR和 Western blotting技术检测梗死灶同侧和对侧的neurocan表达。结果：Neurocan和GFAP的双标结果提示neurocan阳性区域 要大于 GFAP阳性区域，neurocan阳性染色主要分布于胶质细胞及细胞间隙，4周组较 l周组与2周组neurocan mRNA表达显著降低 ，差异显著(P0．O1)，neurocan表达显著降低，差异显著(P0．05)，各组的~eulocanC一末端 糖蛋白无显著差异(P0．05)。结论：Neurocan主要分布于脑梗死周围皮质的细胞间隙。脑梗死后neurocan表达 升高，第 1—2周是高峰期 ，4周下降至低水平，提示neurocan参与脑梗死后病理生理过程。 [关键词] 神经蛋白聚糖；脑梗死 [KEYWORDS] Neurocan；Braininfarction [中图分类号] R743 [文献标识码] A 神经蛋白聚糖 (neurocan)主要表达于未成年脑组织塑型 3 实时荧光定量RT—PCR检测 和重构阶段，是伴随胶质细胞增生而生成的调节因子 ，目前 引物及探针由中山大学达安基因公司合成、标记。序列 认为其与胶质瘢痕形成和轴突生长等生理和病理过程有 如下：nenrocan上游引物为 5一CCGCqTCGACGCCTACTG一 关” 。但对其在脑梗死后具有怎样的表达模式研究 尚少 ， 3；下游弓I物为5一GATcTcGGAGTccccAcGTI一3；neuro． 本研究采用大脑中动脉永久闭塞模型，观察 neurocan的动态 Call探针 为 5 一FAM —TFCCGAGCTCATCACCATACACCA— 表达，探讨neurocan在急性脑梗死病理生理过程中的作用。 TAMRA一3。 —actin为内参照，p—actin上游引物为5一 ACCCCATIGAACACGGC一3；下游引物为5一crCTCAGCT． GTGGTGGT一3。用Trizol法提取脑组织总RNA，行逆转录反 材 料 和 方 法 应：2O 体系中含总RNA4p．L，5×逆转录buffer[50mol／L Tris—HC1(pH8．0)、50mol／LKC1、4moL／LMgC12、10moVL 1 动物分组及模型建立 DTI]4 L，上、下游引物 (10Ixmol／L)各 0．4 L，dNTPs(25 48只健康雄性sD大鼠，体重300—350g，由广东省实验 mol／L)O．2L卜L，MMLV(1×10／L)1 L，DEPC水 10 L。反 动物中心提供 ，随机分为对照组 、梗死 1周组 、梗死2周组和 应条件 ：37oC1h，然后95oC3min。用T—A载体克隆法将 梗死4周组 ，每组 12只。梗死各组均采用电凝法制成大鼠右 546bpneurocan扩增产物克隆至