结直肠癌细胞中脾酪氨酸激酶基因甲基化状态和表达的关系.pdfVIP

维普资讯 · 1720 · p国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(9)：1720—1725 [文章编号] 1000—4718(2008)09—1720—06 结直肠癌细胞中脾酪氨酸激酶基 因甲基化 状态和表达的关系术 杨祖立， 康 亮， 黄关近 ， 王 磊 ， 彭俊生， 向 军， 兰 平 ， 汪建平 (中山大学附属第六医院胃肠外科，中山大学胃肠病学研究所 ，广东 广州510655) [摘 要] 目的：探讨结直肠癌细胞中脾酪氨酸激酶基因甲基化和表达的关系。方法：应用亚硫酸盐修饰测 序、甲基化特异性聚合酶链反应和蛋白印迹技术检测结直肠癌细胞脾酪氨酸激酶的甲基化状态以及表达情况；荧 光素酶报告分析法研究启动子区域CpG岛的甲基化与启动子活性的关系；甲基化转移酶抑制剂处理脾酪氨酸激酶 甲基化失表达的结直肠癌细胞株，观察处理前后细胞内脾酪氨酸激酶基因甲基化状态和表达情况。结果：(1)23 个结直肠癌细胞中，9个细胞启动子发生甲基化而失去蛋白质表达 ；其余则正常表达，甲基化发生率为39．2％；(2) 9个甲基化的细胞中，7个存在微卫星不稳定；而 14个未发生甲基化的细胞中，仅有4个存在微卫星不稳定。二者 之间的差异显著 (P0．05)；(3)脾酪氨酸激酶启动子全长和未甲基化启动子荧光素酶的活性分别是甲基化组的 4．5和4．7倍；5一Aza—CdR可恢复甲基化启动子的活性；(4)5一Aza—CdR可去甲基化而使脾酪氨酸激酶基因重 新表达 ，而且具有时间依从性。结论：结直肠癌细胞中，启动子区域的甲基化导致Syk基因丧失表达，5一Aza—CdR 可以去甲基化而恢复脾酪氨酸激酶基因的表达。 [关键词] 结直肠肿瘤 ；甲基化；脾酪氨酸激酶 [中图分类号] R363 [文献标识码] A CorrelationbetweenhypermethylationandexpressionofSykgeneincolo— rectalcancercelllines YANGZu—li，KANGLiang，HUANGMei—jin，WANGLei，PENGJun—sheng，XIANG Jun，LAN Ping，WANGJian—ping (DepartmetofGastrointestinalSurgery，TheSixthAffiliatedHospital，SunYat—senUnive~i@，Gnangzhou510655，China． E—mail：wangjianping@yahoo．com．ca) [ABSTRACT] AIM：Toexploretherelationshipofmethylationstatusandexpressionofspleentyrosinekinase (Syk)geneincolorectalcancercelllines．METHODS：Bisulfitesodiummodificationsequencing，methylationspecific PCR andW estern blottingwereusedtodetectthemethylationstatusandexpressionofSykgenein23colorectalcancer (CRC)celllines．LuciferaseassaywasappliedtomeasuretheactivityofpromoterwithorwithoutmethylationinCpG islands．Meanwhile，methylationstatusandexpressionlevelwerecomparedinSyk(一)HCT一15celllinebeforeorafter5 一 Aza—CdRadministration．RESULTS：(1)Among23celllines，lossexpressi