赖型钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL41基因真核表达质粒的构建及表达.pdfVIP

维普资讯 · 336 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(2)-336—339 [文章编号】 t000—4718(2007)02—0336—04 赖型钩端螺旋体外膜脂蛋白LipLAI基因 真核表达质粒的构建及表达术 朱海龙， 鲍 朗 ， 李学敏， 张会东 (四川大学华西医学中心感染免疫研究室，四川 成都610041) [摘 要】 目的：构建赖型钩端螺旋体 LipL41基因的真核重组表达质粒 、并对其表达进行检测。方法：以赖 型钩端螺旋体017株基因组 DNA为模板PCR扩增 目的基因，克隆至原核表达质粒pGEX一4T一1上。测序分析后 酶切 ，并连接至真核表达质粒pcDNA3上，构建真核重组表达质粒LipL41一pCDNA3。利用脂质体介导转染COS7 细胞 ，提取细胞总 RNA，RT—PCR检测其表达。结果：PCR扩增出10l1bp大小的目的片段，序列分析显示它与 Leptospirakirschneri的LipL41基因成熟肽序列同源性高达98％。酶切鉴定证实真核重组表达质粒 LipL41一pCD． NA3构建成功，RT—PCR检测显示，LipL41一pCDNA3转染组在大约 1kb处出现特异的扩增带，而空质粒组无此条 带。结论：LipL41的真核重组表达质粒构建成功，并可在哺乳动物细胞中表达。 [关键词】 钩端螺旋体属 ；基因，LipL41；真核表达 [中图分类号】 R377．5 [文献标识码】 A Construction ofeukaryotic expression vector and expression ofouter membranelipoproteinLipIA1geneofLeptospirialai ZHU Hai—long，BAO Lang，LIXue—min，ZHANG Hui—dong (InstituteofInfectionandImmunity，WestChinaMedicalCenter，SCU，Chengdu610041，hCina．E—mail：Baol_ang@ ，noe．edu．Cn [ABSTRACT] AIM：Toconstructa-eukaryoticexpressionvectorexpressingoutermembranelipoproteinLipIA1of Leptospiralainadexpressitinmammaliancel1．METHODS：LipL41genewasma plifiedbyPCR from genomeofLeptospi．． ralai017strain，andWas subclonedintovectorpGEX-4T一1．Aftersequencing LiplA1genedigestedbyrestrictionen． ， donucleaseandclonedintovectorpcDNA3．Afterconfirmingthecorrectnessoftheeukaryoticrecombinnatvectorbyrestri． cationenzymedigestion，itWas trnasfectedintoCOS7ceHsbyliposome．ItsexpressionWas analyzedbyRT—PCR RE．