抑制小鼠HL-1心肌细胞桥粒斑蛋白基因表达对缝隙连接蛋白43结构和功能的影响.pdfVIP

· 982 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(6)：982-987 [文章编号] 1000-4718(2013)06—0982-06 抑制小 鼠HL．1心肌细胞桥粒斑蛋白基因表达对 缝隙连接蛋白43结构和功能的影响木 张黔桓， 邓春玉， 饶 芳， 刘晓颖， 麦丽萍， 朱杰宁， 谭虹虹， 吴书林 (广东省人民医院心内科，广东省心血管病研究所，广东 广州510080) [摘 要] 目的：采用基因沉默技术抑制小鼠HL．1心肌细胞桥粒斑蛋白(DSP)基因表达以明确DSP与缝隙 连接蛋 白43(Cx43)的结构和功能关系。方法 ：用基因沉默技术抑制DSP基因的表达 ，Westernblotting和流式细胞 术检测HL．1细胞DSP和Cx43蛋白的表达，用双免疫荧光方法检测DSP与Cx43蛋白的表达与定位情况 ，并用划痕 标记染料示踪技术检测细胞缝隙连接通讯状况。结果：与空白组和对照组相比，siRNA．DSP组的DSP和Cx43蛋白 表达量降低 (P0．05)。免疫荧光检测发现空白组和对照组 DSP与Cx43蛋 白存在共定位情况 ，而 siRNA-DSP组 DSP和Cx43蛋白共定位遭到破坏，Cx43蛋白出现再分布 ，在细胞内检测到Cx43蛋白，并且划痕标记染料示踪技术 检测发现siRNA-DSP组 Luci~ryellow通过HL·1细胞缝隙连接的传输功能降低。结论：DSP表达抑制不仅使 Cx43 出现再分布，而且影响缝隙连接传导功能。 [关键词] 缝隙连接蛋白43；桥粒斑蛋白；基因沉默；HL．1细胞 [中图分类号] R542．2 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．06．004 Inhibition ofdesmoplakin expression inducesconnexin 43 remodeling in mouseHL．1myocardialcells ZHANGQian—huan，DENGChun—yu，RAOFang，LIUXiao-ying，MAILi-ping，ZHUJie— ning，TAN Hong—hong，WU shu—lin (DepartmentofCardiology，GuangdongGeneralHospital，GuangdongCardiovascularIastit~e，Guangzhou510100，China． E—mail：wushulind@gmail．corn) [ABSTRACT] AIM：Toevaluatethecontent，distribution，andfunctionofconnexin43(Cx43)gapjunctionsin mouseHL-1myocardialcellsundertheconditionofdesmoplakin(DSP)silencing．METHODS：ThetechniqueofRNA interferencewasusedtoinhibittheproteinexpressionofDSPinHL一1cells．TheproteinexpressionofDSPandCx43was analyzedbyWestern blottingandflow cytometry．Theimmunofluorescencestainingwasusedtodetectthedistributionand co—localizationofDSPandCx43． etechniquesofscrapeloadingnaddyetransferwerealsousedtodeterminethefunction ofCx43gapjunctions．RESULTS：Compraedwithnon—treatmentgroupandnegativecontrolgroup，theproteinexpression 0fDSPnadCx43was reduced(P0．05)．Co—localizationtothesiteofcel1．cellcontac