同型半胱氨酸对血管内皮细胞增殖、贴壁和迁移的影响.pdfVIP

维普资讯 主隧 堡生堡 查 ：ch ou ofathophys山gy2008，24(2)：390—392 [文章编号] 1000—4718(2008)02—0392—03 同型半胱氨酸对血管内皮细胞增殖、 贴壁和迁移 的影响木 谭红梅，赵 驰， 吴伟康， 李 艳， 张选红 (中山大学中山医学院病理生理教研室，广东 广州510080) [摘 要] 目的：探讨同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)对血管内皮细胞生长、增殖 、贴壁和迁移的影响。方 法：将人脐静脉内皮细胞(HUVEC，6—8代)采用含20％胎牛血清 (FBS)、60mg／L内皮细胞生长添加剂(endothe． 1ialcel1．growthsupplement，ECGS)、0．005U／L肝素的M199培养。在加入不同浓度的Hcy处理后，用胰酶消化细 胞，白细胞计数板计数细胞；同时通过[H]胸腺嘧啶核苷掺人实验观察 Hcy对HUVEC细胞增殖的影响。此外，在 加入不同浓度的Hcy处理后 ，用胰酶消化细胞，重新接种于纤连蛋白包被过的培养皿 中，静置培养30min，洗掉未 贴壁细胞，对贴壁细胞进行固定、结晶紫染色、脱色、比色，观察 Hcy对细胞贴壁的影响。并进一步通过划伤实验观 察 Hcy对内皮迁移的影响。结果 ：100mmol／L及以上浓度的Hcy能抑制HUVEC增殖 、DNA合成和细胞迁移 ，200 mmol／L及以上浓度的I-Icy能抑制 HUVEC贴壁，并且随着剂量的加大，抑制作用都逐渐增强。结论：Hcy对 HU． VEC细胞增殖、DNA合成、细胞迁移及贴壁均有着不同程度的抑制作用。这可能是 Hcy参与动脉粥样硬化发病的 机制之一。 [关键词] 内皮细胞 ；同型半胱氨酸；细胞增殖；粘连；细胞运动 [KEYWORDS] EndotheliMcells；Homocysteine；Cellproliferation；Adhesions；Cellmigration [中图分类号] R363 [文献标识码] A 近年来大量的临床试验及流行病学研究证实血浆同型 M199(Sigma)。将 HUVEC置 37℃、5％CO2培养箱内静置培 半胱氨酸水平升高 (hyperhomocysteinemia，HHcy)是心血管 养。 疾病的1个独立的危险因素 ,21。Framingh锄 心脏研究中心 2 Hcy对 HUVEC生长增殖的影响 的研究结果表明患者血浆同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy) 将细胞接种于24孔板，待贴壁 良好，生长至60％一70％ 水平升高将使心脏病发作的风险提高 3—4倍 』，然而迄今 饱和时，用无血清培养液处理24h，然后加入不同浓度 (50、 为止，对于 HHcy促进心血管疾病发病的机制仍不甚 了解。 100、200、500mmol／L)的Hcy(Simga)处理2d(对照组加入等 内皮功能损伤是冠心病等动脉粥样硬化疾病的共同发病基 量PBS)，胰酶消化，白细胞计数板计数细胞 ，观察Hcy对 HU． 础，对内皮细胞的损伤导致内皮功能失调可能是 HHcy导致 VEC增殖的影响。每组设3孔 ，重复3次。 心血管损害的重要机制之一。本研究将在细胞水平上探讨 同时采用 [H]胸腺嘧啶核苷掺人实验观察 Hcy对 HU— Hcy对人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalvascularendotheli· VEC细胞DNA合成的影响。将4×10HUVEC细胞接种于 alcell，HUVEC)增殖、贴壁、迁移的影响 ，为阐明HHcy在动脉 24孔板，待到生长至60％一70％饱和时，加入不同浓度 (50、 硬化发病中的作用和机制提供实验依据。 100、200、500mmol／L)的Hcy处理细胞24h，对照组加入等量 PBS。在实验结束前 4h加入 [H]胸腺嘧啶核