人骨髓胚胎样干细胞向多核肌纤维诱导分化的研究.pdfVIP

理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(6)：1147—1152 · 1147 · [文章编号] 1000—4718(2012)06—1147—06 · 实验技术 · 人骨髓胚胎样干细胞向多核肌纤维诱导分化的研究 庞荣清 ， 张永云 ， 阮光萍 ， 朱向情 ， 何 洁 ， 赵 晶 ， 王利民 ， 潘兴华 ， 张 成 (成都军区昆明总医院干细胞与组织器官工程研究中心，云南 昆明650032； 。云南农业大学农科专业基础实验教学示范中心，云南 昆明650201；中山大学附属第一医院神经内科，广东 广州510080) [摘 要] 目的：比较骨髓来源的胚胎样干细胞 (ELSCs)与间充质干细胞(MSCs)的体外成肌分化能力。方 法：采用胚胎干细胞扩增用的无血清Knockout—DMEM培养基在明胶包被过的培养瓶中培养人骨髓单个核细胞以 分离ELSCs，传统方法从相同骨髓中分离MSCs，倒置相差显微镜下观察细胞形态特征，采用免疫荧光染色鉴定多潜 能抗原标志的表达。成肌分化液分别培养ELSCs和MSCs，采用免疫染色法检测肌纤维特异性抗原标志肌球蛋白 重链 (MHC)、成肌素(myogenin)和MyoD蛋白的表达 ，RT—PCR检测 MHC、myogenin和MyoDmRNA的表达 ，计算 MHC阳性肌纤维的比例以比较ELSCs与MSCs的体外成肌分化能力。结果：无血清培养基可从骨髓 中分离到弱表 达多潜能抗原标志Oct一4、Nanog一3和Sox一2的ELSCs，体积较小，形态纤细均一 ，在形态方面不同于相同骨髓来 源的MSCs，后者不表达多潜能抗原标志。在成肌分化液中培养，ELSCs和MSCs均可被诱导为在蛋白和mRNA水 平表达MHC和myogenin的多核肌纤维，但诱导培养 10d时。ELSCs的MHC蛋白阳性肌纤维的比例为(25．74- 4．1)％，MSCs为(15．8±7．6)％，ELSCs的成肌分化能力明显高于MSCs(P0．05)。结论：骨髓ELSCs能被诱导为 多核肌纤维，并具有比来 自相同骨髓的MSCs更强的成肌分化能力，ELSCs是肌病治疗更理想的种子细胞。 [关键词] 胚胎样干细胞；骨髓 ；成肌分化 ；肌纤维 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．06．036 Differentiation ofembryonic—likestem cellsderivedfrom human bone marrow intomultinucleated fibersin vitro PANG Rong—qing ，ZHANGYong—yun ，RUAN Guang—ping ，ZHUXiang—qing ， HEJie，ZHAOJing，WANGLi—min ，PANXing—hua，ZHANGCheng (CenterforStemCelland~ssueOrganEngineering，Kunming GeneralHospitalofChengdaMilitaryCommand ofPLA， Kunming650032，China；TeachingDemonstrationCenterofBasicExperimentsforAgriculturalMajors，YunnanAgricultur— alUniversity，Kunming650201，China；DepartmentofNeurology，theFirstAffiliatedHospital，Sunrat—selzUniversity， Guangzhou510080，hCina．E—ma il：pangrq2000@yahoo．con．clz) [ABSTRACT] AIM：Tocomparethecapacityofinvitrodifferentiationintomuhinucleatedfibersbetweenembry-