人晶状体上皮细胞蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定.pdfVIP

维普资讯 · 1598· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysi !垫()； = [文章编号] 1000-4718(2007)08—1598—04 人晶状体上皮细胞蛋 白质组的双向电泳和质谱鉴定 李宏武， 姚 克 ， 金红颖， 孙丽霞 (浙江大学医学院附属第二医院眼科中心，浙江 杭州310009) [摘 要] 目的：建立人晶状体上皮细胞蛋白质组研究体系，探讨双向电泳和质谱鉴定技术在人晶状体上皮 细胞蛋白质组研究中的作用。方法：体外培养人晶状体上皮细胞株，用两种不同方法提取总蛋白，进行固相 pH梯 度 (IPG)等电聚焦双向凝胶电泳 ，凝胶通过 GS一800扫描仪(Bio—Rad)获取图像并使用PDQuest专业图像分析软 件分析。在此基础之上 ，胰酶消化蛋白质斑点并进行质谱分析。结果：获得了重复性较好的人晶状体上皮细胞蛋 白质组电泳图谱。晶状体蛋白质斑点在等电点pH值为4—7、相对分子质量为 17—72kD之间均有分布。其中高 丰度蛋白点主要分布于分子量 19—50kD、PI5—7范围内。2个蛋 白点通过质谱分析和数据库的检索得到了初步 的鉴定。结论：建立起了一个稳定的分析人晶状体上皮细胞蛋白质组学实验体系；为进一步研究人类晶状体在生 理状态及 白内障等病理条件下的改变提供了蛋白质组学的研究方法和途径。 [关键词] 蛋白质组；电泳，凝胶 ，双向；光谱分析，质量；晶体 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Theproteomeresearchofhumanlensepithelialcellsbytwo--dimensional gelelectrophoresisand massspectrometry LIHong—wu，YAOKe，JINHong—ying，SUNLi—xia (DepartmentofOphthalmology，TheSecondAffilmtedHospital， ，lgUniversitySchoolofMedicine，Hangzhou310009， China．E—mail：xlren@4u．edu．crt) [ABSTRACT] AIM：Toestablishthetechniquesintheproteomeresearchofhumanlensepithelialcells，inclu— dingthetechniquesoftwo—dimensional electrophoresisnadmassspectrometry．M ETHODS：Totalproteinofculturedhu— mna lensepithelial ceilswasextractedwithtwokindsofdifferentmethods．Theproteinswereseparatedusingimmobilized pH gradients2一DEna dvisualizedbysilverstaining．Th edigitizedimagesobtainedbyGS一800scna erwerethennaalyzed withPDQuestsoftwraeinordertoestbalishthedifferentialexpression．profiles．Thedifferentialexpressedproteinspotswere cutfromthegelsusingproteomeworkspotcutternadsubjectedtoin—geldigestionwithtrypsin．Thedigestedpeptidesepa— rationWaSconductedbyaFinnigna LCQMScoupledwithaSurveyorHPLCsystem．RESULTS：Ahighresolutionandre- producible2一ED imageWaSsuccessfullyobt