人脐静脉来源的间质干细胞体外分离扩增及多向分化的研究.pdfVIP

维普资讯 生国痘堡生理苤查 ne! fPathophysiology 2006，22(10)：1960—1964 [文章编号] 1000—4718(2006)10—1960—05 人脐静脉来源的间质干细胞体外分 离扩增及多向分化的研究 唐晓琼， 赵智刚， 王红祥， 李秋柏， 邹 萍 (华中科技大学同济医学院附属协和医院血研所，湖北 武汉430022) [摘 要] 目的：探讨人脐静脉来源的间质于细胞(MSCs)的体外分离、纯化、扩增和多向分化条件。方法：无 菌条件下取正常人脐静脉，1％胶原酶 1I消化脐静脉细胞，以IMDM作为培养基进行培养和纯化细胞，瑞氏染色和电 镜观察形态；FACS检测其免疫表型和细胞周期；体外诱导成骨细胞、脂肪细胞分化 ，yonKossa染色、油红O染色和 RT—PCR检测骨钙蛋白、脂蛋白脂酶mRNA的表达以检测细胞向成骨、成脂肪细胞分化情况。结果：脐静脉来源的 细胞呈纤维样贴壁生长，瑞氏染色和电镜观察具有 MSCs特征；FACS检测结果显示 ，表达 MSCs相关的抗原CD29、 CD44、CD105，而CD31、CD13、CD34、CIM5、HLA—DR为阴性 ；体外诱导成骨细胞、脂肪细胞分化成功。结论 ：人脐静 脉来源的MSCs的细胞形态、生长特性 、免疫表型、多向分化能力与骨髓来源的MSCs相似，可作为满足实验和临床需 要的MSCs来源。 [关键词] 问质干细胞 ；脐静脉；骨髓 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Isolation andmultilineagedifferentiation ofmesenchymalstem cellsfrom humanumbilicalcordveininvitro TANGXiao—qiong，ZHAOZhi—gang，WANGHong—xiang，LIQiu—bai，ZOUPing (DepartmentofHematology，UnionHospital，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology， Wuhan430022，China) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheisolation，purification，expansionandmuhilineagedifferentiationofmesen— chymalstemcells(MSCs)derivedfromhumanumbilicalcordveininvitro．METHODS：Byl％ collagenase1Idigestion， endothelialcellswereisolatedfrom humanumbilicalcordveinandculturedinIMDM medium．Themorphologyofthecells wasobservedbyWright’Sstainingna delectronmicroscope．Cellcycleandimmunophenotypewereinvestigatedbyflow cy— tometry．Assaysofadipogenicandosteogenicdifferentiationwereperformedinvitro．yonKossastaining，OilRedO staining andmRNAexpressionofosteopo ntinandlipoproteinlipasewerestudiedintheinducedcells．RESULTS：Thecellsfrom the cordveindisplayedafibroblast—likemoprholoyg adheringtothecultureplate．FACSshowedthatthe