人乳头瘤病毒关键基因在裸鼠体内表达的初步研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(2)：209—2】4 · 209 · [文章编号] 1000—4718(2009)02—0209—06 · 论 著 · 人乳头瘤病毒关键基因在裸鼠体 内表达的初步研究 潘巍巍 ， 徐 营 ， 易发平 ， 曹利仙 ， 卜友泉 ， 赖国旗 ， 宋方洲 (重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室，重庆400016；嘉兴学院医学院，浙江 嘉兴314001； 教育部临床检验诊断学重点实验室，重庆医科大学动物实验中心，重庆400016) [摘 要] 目的：初步研究 HPV16E6／E7基 因在裸 鼠体内不同组织引起的病变。方法：将重组腺病毒 Ad—CMV—E6／E7、Ad—K14一E6／E7病毒上清以及作为对照的重组腺病毒空载体pAd—CMV和pAdtrack的上清 液 ，经过纯化后，通过裸鼠的尾缘静脉注射到裸鼠体内，并每天注射0．05mg雌激素到注射病毒的裸鼠，同时做阴 性对照。12周后给裸鼠注射2．5％阿佛丁进行麻醉 ，并将其耳朵、头颈部皮肤、口腔黏膜 、结肠、直肠、子宫颈一阴 道移行区等组织取出，浸泡在 3．75％多聚甲醛中4℃固定过夜 ，然后做石蜡包埋切片 、HE染色、免疫组化检测P53 蛋白和 Bcl一2的表达，取裸鼠的各个组织提取DNA、RNA和蛋白质，然后分别检测有无重组腺病毒的感染、病毒表 达的情况及 E6蛋白的表达。结果：实验组 1注射腺病毒Ad—K14一E6／E7的裸鼠组织 HE染色结果显示裸鼠子宫 颈一阴道移行处的增生较明显。sP法免疫组化发现突变型P53和Bcl一2在该组裸鼠的子宫颈 一阴道移行处表达 都增加 (P0．05)，并且RT—PCR检测子宫颈 一阴道移行处组织也有E6／E7的表达，Westernblotting检测该组织 也有E6蛋白的表达。结论：K14启动子增加了E6／E7在裸鼠子宫颈 一阴道移行处的表达，并且使子宫颈一阴道 移行处的上皮组织发生病变。 [关键词] 乳头状瘤病毒，人 ；腺病毒；基因，E6／E7；小鼠，裸 [中图分类号] R373．39 [文献标识码] A PreliminarystudyofHPV criticalgeneexpressioninnudem icein vivo PAN W ei—wei ，XU Ying ，YIFa—ping ，CAO Li—xian ，BU You—quan ，LAI Guo—qi．SONG Fang—zhou ’ (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，ChongqingUniversityofMedicalSciences，Chongqing400016，Chi— na；JiaxingUniversityCollegeofMedicine，Jiaxing314001，China；LaboratoryAnimalCentre，ClinicalDiagnosticsKey LaboratoryofMinistryofEducation；LaboratoryAnimalCentre，ChongqingUniversityofMedicalSciences，Chongqing 400016，China．E—mail：fzsongcq@163．tom) [ABSTRACT] AIM：TostudyHPV16E6／E7geneexpressionindifferenttissueofnudemice．METHODS：Af- terpurified，recombined adenovimsAd—CMV —E6／E7，Ad—K14一E6／E7wereused asexperimentalgroup，while pAd—CMVandpAdtrackwereusedascontrolgroup．Fourofthemwereinjectedthroughonemainveinofnudemicetail． Then，thesemicewere