人外周血来源内皮祖细胞诱导分化为心肌样细胞的实验研究及机制探讨.pdfVIP

维普资讯 生国疸理生理苤圭— hif!ese—J—ournalofPathophysiology 2007，23(10)：2054—2056、2062 [文章编号] 1000—4718(2007)10—2054—04 · 短篇论蓍 · 人外周血来源内皮祖细胞诱导分化为心肌样 细胞的实验研究及机制探讨 邵诗颖 ， 王红祥 ， 李宾公 ， 邹 萍 (华中科技大学同济医学院附属协和医院 血液科 ，心内科 ，湖北 武汉 430022) [摘 要] 目的：研究人外周血来源内皮祖细胞(EPCs)在体外定向分化为心肌样细胞的能力及其可能机制。 方法：分离培养及鉴定健康人群 (对照组)及冠心病 (CAD)患者(实验组)EPCs。将对照组及实验组EPCs分别分 成3组在体外进行分化诱导实验：A组 EPCs与乳鼠心肌共培养；B组 EPCs与多聚甲醛固定后的乳鼠心肌共培养； C组 于EPCs中加入收集到的乳鼠心肌培养液上清诱导培养。观察心肌样细胞形态变化；2周后免疫荧光法检测 心肌肌钙蛋白 (cTnT)和结蛋 白(desmin)的表达；逆转录一聚合酶链反应 (RT—PCR)检测心肌相关基因ANP、 cTnT、cTnI和主要组织相容性复合物 Ot链 (otMHC)的表达 ；流式细胞仪检测 HLA—DR和人 desmin的表达，计数 desmin阳性表达细胞。结果：实验及对照A、B组EPCs均可呈现心肌样细胞形态；ANP、cTnT、cTnl和otMHC基因 及 cTnT和desmin蛋白均呈阳性表达；流式检测 HLA—DR及 desmin呈双阳性表达 ，对照 A组分化率为 (9±2)％， 实验 A组分化率约为(4±1)％，差异显著(P0．01)。实验及对照C组EPCs形态未发生变化，各项检测指标均为 阴性表达。结论：与乳鼠心肌共培养可诱导人外周血来源EPCs分化为心肌样细胞 ，且其可能机制为细胞间的直 接接触。 [关键词] 内皮祖细胞；心肌样细胞 [KEYWORDS] Endothdialprogenitorcells；Cardiomyocyte—likecells [中图分类号] R363 [文献标识码] A 很多心血管疾病如心肌梗死会损伤正常心肌细胞从而 (P0，05)。 影响心脏功能。由于心肌细胞再生能力有限，因此应用细胞 2 材料与试剂 移植治疗来替换受损心肌组织具有重要的临床意义…。最 M199培养基 (Gibco)，胎牛血清 (FBS，Gibco)，血管内皮 近有学者发现小鼠胚胎内皮细胞以及人胚胎干细胞均具有 生长 因子 (vascularendothelial growthfactor，VEGF，Pepro— 体内外分化为心肌样细胞的能力 J。然而移植异基因胚胎 tech)，碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastbFGF，Pepro— 干细胞会导致一系列后续临床问题。而内皮祖细胞 (endo— tech)，表皮生长因子 (endothdialgrowthfactor，EGF，Sigma)， thelialprogenitorcells．EPCs)为一类骨髓来源的具有分化为 人纤维连接蛋 白(humanfirbronectin，HFN，Chemicon)，DiIac 成熟内皮细胞潜能的祖细胞 ，不仅参与血管新生过程，也具 — LDL(MolecularProbes)，UEA一1(10mg／L，Simga)，抗人 有分化潜能，参与血管内皮细胞损伤后修复 。本实验 旨在 CD34抗体、抗人 KDR抗体、抗人 cTnT抗体、抗人 HLA—DR 探明人外周血来源的EPCs是否同样能够在体外定向分化为 抗体及抗人desmin抗体 (Sigma)，抗人CD133抗体 (Abcam)， 心肌样细胞。为此本实验对健康人群 以及 CAD患者来源的 Trizol(Invitrogen)，cDNA第 1链合成试剂盒、