人着色性干皮病基因D对HepG2细胞Mdm2和Mdm4表达的影响.pdfVIP

· 48 · 志 ChineseJournalofPathophysiology 2014’ ()； [文章编号] 1000—4718(2014)01—0048-05 人着色性干皮病基因D对 HepG2细胞 Mdm2和 Mdm4表达的影响水 丁 浩， 张吉翔 (南昌大学第二附属医院消化内科，江西 南昌330006) [摘 要] 目的：探讨人剪切修复基因着色性干皮病基因D(xerodermapigmentosumD，XPD)对肝癌细胞鼠 双微体2(murinedoubleminute2，Mdm2)和鼠双微体4(murinedoubleminute4，Mdm4)表达的影响。方法：用脂质 体转染法将重组质粒pEGFP．N2／XPD和空载质粒 pEGFP-N2转染进入人肝癌细胞株HepG2，实验分为3组：(1)空 白对照组；(2)pEGFP．N2组；(3)pEGFP．N2／XPD组。用MTY法观察细胞的增殖活力；用流式细胞术检测细胞周期 和凋亡率；用RT．PCR和Westernblotting检测XPD、Mdm2、Mdm4和P53表达量的变化。结果：MTY结果显示，重组 质粒pEGFP．N2／XPD的转染抑制了肝癌细胞的增殖活力；流式细胞术结果显示，重组质粒 pEGFP-N2／XPD的转染 引起了G1期细胞增加 ，s期减少 ，凋亡率增加。RT—PCR和Westernblotting检测发现，重组质粒pEGFP—N2／XPD的 转染使得XPD表达增高，同时使得Mdm2和Mdm4表达降低，P53表达增高。结论：XPD能下调肝癌细胞中Mdm2 和Mdm4的表达，上调P53表达，并能抑制肝癌细胞增殖及诱导其凋亡。 [关键词] 着色性干皮病基因D；HepG2细胞；鼠双微体2；鼠双微体4 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2014．01．008 Effectofhumanxerodermapigmentosmu D onexpressionofM dm2and M dm4inHepG2cells DINGHao．ZHANGJi．xiang (DepartmentofGastroenterology，theSecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity，Nanchang330006，China． E—mail：jixiangz@tom．com) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectsofhumanxerodermapigmentosumD (XPD)ontheexpressionof murinedoubleminute2(Mdm2)andmurinedoubleminute4(Mdm4)inhumanhepatomacells．METHODS：Recombi— nnatplasmidpEGFP·N2／XPD andvacnatplasmidpEGFP-N2weretrnasfeetedintoHepG2ceHsusingliposome，andhte ceHsweredividedintoblankcontrolgroup，pEGFP-N2groupnadpEGFP—N2／XPDgroup．Thecellgrowthwasdetectedby MTYassay．Thecellcycleandapoptoticratewereexaminedbyfloweytometry．ThemRNAnadproteinexpressionlevelsof XPD，Mdm2，Mdm4andP53weredeterminedbyRT-PCR nadWestern blotting．RESULTS：Th eresultsofMTrassay showedhtatthecellgrowthwas inhibitedbythetrnasfectionofpEGFP—N2／XPD．Theresultsofflow