黏附素5胞外区克隆、转染及抗人乳腺癌细胞生长的研究.pdfVIP

维普资讯 · l7l0· 虫国痘堡生理盘查 hil1e‘_Jouma1ofPathophysiology 2007，23(9)：1710—1715 [文章编号] 1000—4718(2007)09—1710—06 黏附素 5胞外区克隆、转染及抗 人乳腺癌细胞生长的研究 石小玉 ， 李文林 ， 熊丽霞 ， 张际青 ， 熊建军 ， 李 红 (南昌大学医学院，江西省医学生物高技术重点实验室，江西省医学科学研究所，江西 南昌330006； DIFEMA，Facult~deM~decineetdePharmaciedeRouen，76000Rouen，FranceCNRS) [摘 要] 目的：克隆和转染黏附素5胞外区，并研究其对人乳腺癌MDA—MB435细胞株生长的影响。方 法：RT—PCR技术克隆黏附素5胞外区(称为CEDI一4)，将其插入pMSCV质粒载体，在大肠杆菌xL—blue扩增 ． 提取和纯化pMSCV—CEDI一4，酶切、电泳和测序检测 CEDI一4序列。CEDI一4基因转染MDA—MB435细胞株， RT—PCR和Westernblotting检测 MDA—MB435细胞表达CEDI一4。细胞增殖实验和乳腺癌裸小鼠致瘤实验检测 CEDI一4对MDA—MB435细胞体内外生长的影响。结果：构建了重组体 pMSCV—CEDI一4，电泳显示 CEDI一4 条带在 1636bp一1018bp区间，测序显示CEDI一4基因长 1452bp，编码484氨基酸。经PCR和Westernblotting 证实，CEDI一4基因转染的MDA—MB435细胞在 mRNA和蛋 白质水平表达 CEDI一4。细胞增殖实验结果表明， 实验组 MDA—MB435细胞增殖低于实验对照组和空白对照组 (P0．05)。乳腺癌裸小鼠致瘤实验显示，实验组移 植瘤平均体积和重量低于实验对照组和空白对照组 (P0．05)。结论：黏附素5胞外区CEDI一4能在体内外抑制 人乳腺癌 MDA—MB435细胞株的生长。 [关键词] 钙粘着糖蛋白类；克隆；乳腺肿瘤；基因转染 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Cloning，transfer and anti—human breastcancer cellgrowth ofthe extracellulardomainofcadherin5 SHIXiao—yu ，LIWen—lin ，XIONG Li—xia ，ZHANGJi—qing ，XIONGJian— ian ，LIHong4 (MedicalCollege，~angxiKeyLaboratoryofMedicalBiology，JiangxiMedcialScienceImt~ute，NanchangUniversity， ^，lc ，lg330006，China； DIFEMA，FacultddeM~decineetdePharma~eideRouen，76000Rouen，FranceCNRS) [ABSTRACT] AIM_,Inordertostudytheeffectoftheextracellulardomainofcadherin5onthegrowthofahu- lnanbreastcnacercelllineMDA—MB435．METHODS：Cadherinextracellulardomainrepeats1to4(CEDI一4)was clonedbyusingRT—PCR technique．na dinseade intotheplasmidvectorpMSCV．pMSCV—CEDI一4waspropagatedin XL—bluestrainofEscherichiacoli，extractde andpurified．CEDI一4wascutbyrestrictionendonuclease，examinedbyu-