尿酸对外周血内皮祖细胞数量与功能的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008。24(10)：2060—2062 [文章编号] 1000-4718(2008)10—2060—03 尿酸对外周血 内皮祖细胞数量与功能的影响木 姜冬梅 ， 张芙荣 ， 朱军慧， 谢旭东， 陈君柱 (浙江大学医学院附属一院心血管内科，心血管病研究所 ，浙江 杭州 310003) [摘 要] 目的：观察尿酸对外周血内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)数量与功能的影响。方法： 采用 Fieoll密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞，将其接种于包被人纤维连接蛋白的培养板上，培养 14d后 收集贴壁细胞，加入不同浓度 (50mg／L，150mg／L，300ms／L)尿酸分别培养24h、48h、72h。激光共聚焦显微镜鉴 定，FITC—UEA—I和Di1一acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs，并在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采 用MTr比色法、黏附能力测定实验来观察EPCs的增殖能力、黏附能力。结果：尿酸呈量效和时效地增加 EPCs数 量 ，300mg／L尿酸作用48h后EPCs数量明显多于对照组(32．5±3．6伪78．2±4．1，P0．O1)，并增加EPCs增殖 能力(0．179±0．005) (0．322±0．011)，P0．01，和黏附能力 (20．5±3．7) (67．8±4．9)，P0．O1。结论： 尿酸可增加EPCs数量并改善EPCs的增殖及黏附能力。 [关键词] 尿酸；内皮祖细胞；细胞培养；冠脉动脉疾病 『KEYWORDS] Uricacid；EndothelialprogenitorceHs；Cellculture；Coronarydisease [中图分类号] R363 [文献标识码] A 近年来研究认为高尿酸血症促进动脉粥样硬化的发生、 连接蛋白包被的培养板上。M199培养基 (含 20％胎牛血清、 发展，是冠心病的危险因素之一…。血管内皮功能障碍与动 VEGF50 g／L、青霉素 1×10U／L、链霉素 1×10U／L)培养 脉粥样硬化密切相关。国内外关于尿酸对内皮细胞功能影 4d，洗掉非贴壁细胞，换培养液继续培养至 14d，洗掉非贴壁 响的报道不一，有研究报道尿酸的抗氧化特性可改善内皮细 细胞，贴壁细胞供实验用。 胞的增殖能力 J。内皮祖细胞 (endothelialprogenitorcells， 2．2 尿酸溶液的配置 取尿酸(uricacid)粉末若干，称量后 EPCs)是能直接分化为血管内皮细胞的前体细胞 ，不仅参与 置于预热的M199中，磁力搅拌器上加热摇匀，待完全溶解 胚胎血管生成，而且最近研究发现其也参与出生后的血管新 后 ，置超净台内用0．22Izm滤器过滤除菌后室温保存，使用 生和内皮损伤的修复 J，在冠心病的发生、发展可能起着重 时用 M199稀释到各所需浓度。 要作用 J。目前虽有冠心病患者循环 内皮祖细胞功能与尿 2．3 实验分组 贴壁细胞随机分成4组，每组6孔，一组为 酸浓度呈负相关的临床报道 ，但高尿酸血症对于内皮祖细 对照组(正常培养组)，其余 3组分别加入含 (50mg／L，150 胞数量及功能的直接影响却尚未阐明。本研究 旨在观察高 mg／L，300ms／L)尿酸的培养基，各组分别培养24hASh．72h。 尿酸血症对内皮祖细胞数量与功能的影响。 2．4 细胞染 色与鉴 定 细胞与 acLDL—Dil(2．4ms／L) 37℃下孵育rh以检测EPCs对 acLDL—Dil的摄取。然后用 材 料 和 方 法 2％多聚甲醛固定细胞 10min。固定后用 PBS浸洗，将 FITC 1 材料与试剂 — UEA—I(10s／L)加入上述标本在 37℃下孵育 1h。激 尿酸 (uricacid)购 自Sigma；含双抗的M199及FITC标记 光共聚焦显微镜 (1aserscanningconfocalmicros