抗骨松丹杞颗粒含药血清对成骨-破骨细胞共培养体系中破骨细胞功能的影响.pdfVIP

生理杂志 ChineseJournal0f P! QQ： l2；!箜 二!鱼 鱼2 · l635 · [文章编号】 1000-4718(2010)08—1635—03 抗骨松丹杞颗粒含药血清对成骨 一破骨细胞共培养 体系中破骨细胞功能的影响术 武密山 ， 赵素芝 ， 李 恩 ， 白 霞 (河北医科大学中医学院方剂学教研室，石家庄市桥东区医院，河北 石家庄 050091) [摘 要] 目的：观察补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在成骨一破骨细胞共同培养体系中对大鼠破骨细胞 (0c)骨吸收功能的影响。方法：取 1d龄 sD大鼠的胎 鼠颅骨与四肢骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞，建 立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨一破骨细胞共育体系，实验分为不同浓度 (低、中、高)的补肾 方含药血清组和对照组进行 比较 ，用重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)和光镜观察骨陷窝数。结果： 25％的补肾方含药血清组在48h、72h、96h成骨一破骨细胞共育体系中0c分泌TRAP的活性明显降低于对照 组；25％的补肾方含药血清组在48h、72h、120h所形成骨吸收陷窝的数 目明显低于对照组 (P0．01)。结论：补 肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在共育体系中能够抑制OC活性。 [关键词] 抗骨松丹杞颗粒 ；含药血清；成骨细胞；破骨细胞 [KEYWORDS] KangGuSongDanQiinstantgranules；Drugseurm；Osteoblasts；Osteoclasts [中图分类号] R332 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．036 既往的研究表明，补。肾方含药血清能够促进大鼠成骨细 1．4 主要仪器 CO：培养箱 (Nuaire)，可调式移液器 (Eppen— 胞雌激素受体mRNA及其蛋白表达 ，纠正失衡的骨偶联，调 dorf)，培养板(Costar)，721可见分光光度计 (上海第三分析 控骨重建周期中的骨形成及骨再建率 …。考虑到骨代谢是 仪器厂)，倒置相差显微镜(重庆光学仪器厂)。 成骨细胞 (osteoblast，OB)与破骨细胞 (osteoclast，OC)共同生 2 方法 活在一起的整体，使用补肾方含药血清对单纯成骨细胞干预 2．1 大鼠血清的制备 参照文献…，制备补肾方含药血清 实验并不能代表补肾方药在体内发挥作用的真实情况，本实 和生理盐水对照血清，并以6．25％、12．5％、25％浓度的含药 验设计更符合骨代谢微环境的成骨一破骨细胞共育体系，并 血清为低、中、高剂量浓度含药血清，作为本实验的添加剂 使用补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清进行了干预，现将结果 量。 报道如下。 2．2 骨片的制备 参照文献_2]，将新鲜牛股骨用金刚砂片 及粗细金钢砂石制备成6mm×6mm大小，10 m厚的骨磨 材 料 和 方 法 片，超声清洗2次，各 10min，置人含 1×10。U／L青霉素和 1 材料 1g／L链霉素的 D—Hanks缓 冲液中浸泡，换液 3次，每次 1．1 动物 清洁级 l0月龄雌性SD大鼠40只，体重 (351± 20min。 12)g，由河北 医科大学实验动物 中心提供，合格证号 为 2．3 OB的分离与培养 参照文献 j，用酶解法从新生大鼠 2007A016。普通级 1d龄SD新生大 鼠，由河北医科大学实验 颅骨获取。 动物中心提供 ，合格证号为200711021。 2．4 OC的分离与培养 参照文献HJ，应用改 良Fenton等的 1．2 药物 补肾方药由淫羊藿、骨碎补、补骨脂、续断、牛膝、 方法 ，由1d龄 S．D大鼠四肢长骨分离 OC。 牡丹皮 、枸杞子、熟地黄、山茱萸、山药、牡蛎 11味中药按照处 2．5 成骨一破骨细胞共育体系的建立 参照文献 J，本研 方剂量组成 (即河北省邯郸制药有限公司