抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备、纯化和保护性实验研究.pdfVIP

维普资讯 理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiol~ogy 2Q ( )；丝 二丝 Z · 2453 · 【文章编号] 1000—4718(2006)l2—2453一o5 抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体 的制备、 纯化和保护性实验研究木 刘四红 ， 孔天翰 (广州医学院广州蛇毒所，广东广州 510182) [摘 要] 目的：探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY)的制备方法及其生物学活性，为替代马源性抗蛇毒血清 奠定基础。方法：眼镜蛇毒原毒免疫母鸡，采用水稀释一硫酸铵盐析 一阴离子交换层析三级提取法纯化 IgY；SDS — PAGE测定各级提取物的抗体纯度；间接ELISA法和双向免疫扩散法观察效价变化；动物体外中和实验检测其 生物活性。结果 ：卵黄经水稀释法及经印％硫酸铵盐析蛋白回收率为40．36％；进一步经阴离子交换层析，总蛋白 回收率 14．86％，效价提高24倍；IgY分子量约为220kD，由两个亚基组成；体外中和试验表明，2．28ms／kg特异性 IgY能完全中和2LD 的眼镜蛇毒，保护小 鼠免受眼镜蛇毒的攻击。结论：以眼镜蛇毒原毒为免疫源，经水提 、盐 析 、层析三级提取，可从鸡卵黄中获得高纯度 、高活性的特异性 IgY。 [关键词] 蛇毒；鸡卵黄抗体 ；眼镜蛇 [中图分类号] R996．3 [文献标识码] A Thepreparation，purificationand biologicalactivityofanti—cobra im- munoglobulinyolk LIU Si—hong．KONG Tian—han (GuangzhouResearchInstituteofSnakeVenom，GuangzhouMedicineCollege，Guangzhou510182，China．E—mail：kongth @ sohu．corn1 [ABSTRACT] AIM ：Inordertosubstituteantivenomfromhorse，thebiologicactivityandpreparingmethodswere investigatedinimmuno~obulinyork(IsY)ofanti—cobra．METHODS：Leghorn henswereimmunizedwithcobravenom． Themethodsofthreestages，waterdilution— ammonium sulfatesaltingout— anionexchangechromatogrma ，wereusde to purifyIgY．SDS— PAGE wasusedtomeasurethepurityofantibody．ThetitervarietyofIgY Was observedbyindirect ELISA naddoubleimmunodiffusion．Th emethod ofpre—incubatingthevenom nadIgYin ，o．Was usedtotesttheprotec． tiveeffectofIgY．RESULTS：Th etotalproteinrecoveryrateofIgYfractionthroughwaterdilutionmehtod(tg／一WD)fo1． 1owedby印％ ammoniumsulphatedepositde (IgY—AS)Was4o．36％．WhenappliedtoDEAEchromatogramfurther，hte totalproteinrecoveryratereducedto14．86％，buthtetiterincreasde by24times．Whenvenomatdoseof1．24ms／kg(2 ×LD50)