黏着斑激酶相关非激酶质粒转染对肝星状细胞凋亡的影响.pdfVIP

理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2 丝( )；塑二 · 2239 · [文章编号】 1000-4718(2008)11—2239—06 黏着斑激酶相关非激酶质粒转染对 肝星状细胞凋亡的影响 中建刚， 张晓岚 ， 霍晓霞，魏 娟 (河北医科大学第二医院消化科，河北 石家庄050000) [摘 要] 目的：应用黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒瞬时转染肝星状细胞(HSCs)，探讨 FRNK选 择性抑制黏着斑激酶 (FAK)磷酸化对 FN刺激的HSCs凋亡的影响。方法：在体外培养 HSCs，以FN刺激 HSCs增 殖，采用脂质体介导的方法进行FRNK表达质粒转染。应用膜联蛋白(Annexin—V)／碘化丙啶(PI)双标记流式细 胞术、DNA凝胶电泳技术和透射 电镜技术检测细胞 的凋亡 ，Westernblotting及 RT—PCR方法检测 FRNK、FAK、 P—FAK(Ty )、caspase一3蛋白及其 mRNA表达。结果：FRNK表达质粒成功转染HSCs，在翻译后水平抑制FAK 磷酸化；FRNK表达质粒转染 HSCs48h后 ，细胞凋亡率增加，与空质粒组之 间有显著差异[(25．37±1．92)％ffs (9．28±1．05)％]，P0．01，伴随caspase一3在翻译和转录水平的增高[(264．17±12．60 185．82-1-9．69)，P0．01； (4．19-4-0．48vs1．07±0．27)，P0．01]。结论：在脂质体介导下瞬时转染 FRNK表达质粒，可使外源性的FRNK 在HSCs内大量表达，在翻译后水平抑制FAK磷酸化；可以诱导FN刺激的HSCs发生凋亡。 [关键词】 肝星状细胞；细胞凋亡 ；黏着斑激酶相关非激酶 ；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 [中图分类号] R363 [文献标识码] A EffectofFAK ——relatednon——kinaseonapoptosisinhepaticstellatecells SHENJian—gang，ZHANGXiao—lan，HUOXiao—xia，WEIJuan (DepartmentofGastroenterology，TheSecondHospitalofHebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050000，China．E—mail： 口ofn @ 126．com) [ABSTRACT] AIM：ToevaluatetheinhibitoryeffectofFRNKonthephosphorylationofFAKandapoptosisin hepaticstellatecells(HSCs)．METHODS：Afterstimulatedwithfibronectin，HSCswastransfectedwithFRNKplasmid bycationicliposomemethod．Theapo ptosisofFRNK —induced HSCswas examinedby Annexin—V／propidium iodide double—labeledflowcytometry (FCM)，gelelectrophoresisandtransmissionelectronmicroscope．Theproteinlevelsof FRNK，FAKandP—FAK (Tyr3)inHSCswereassayedbyWesternblotting，nadRT—PCRwasusedtodetecttheex— pressionofmRNA．RESULTS：TheexpressionofFRNKwasenhancedandthephosphorylationofFAKwas inhibitedafter FRNKwas trnasientlytrna sfectedintoHSCsinvitro．TheapoptoticrateinHSCsexposed toFRNK plasmidfor48hwas