内毒素预处理促进金黄色葡萄球菌刺激的巨噬细胞生成一氧化氮.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(6)：1181—1186 [文章编号] 1000—4718(2010)06—1181—06 内毒素预处理促进金黄色葡萄球菌刺激的 巨噬细胞生成一氧化氮 胡 佳 ， 杨 涛 ， 王蓓蕾 ，倪潇晓 ， 周国武 ， 倪 鑫 ， 朱晓燕 (第二军医大学 基础部生理学教研室，长海医院麻醉科，上海 200433) [摘 要] 目的：明确脂多糖 (LPS)预处理后巨噬细胞对后续热灭活革兰氏阳性金黄色葡萄球菌 (HKSa)刺 激的反应性变化 ，并探讨其机制。方法：Griess法检测细胞培养上清一氧化氮 (NO)含量；实时荧光定量 PCR和 Westernblotting技术检测Toll样受体2(TLR2)mRNA和蛋白表达；双荧光报告基因检测法观察细胞内活化T细胞 核因子(NF—AT)转录活性。结果：LPS预处理小鼠巨噬细胞系 RAW264．7细胞24h后 ，该细胞在后续 HKSa刺激 下NO生成量显著增加 ，提示LPS可以致敏巨噬细胞、增强其对HKSa的反应性。LPS可以剂量依赖性地增加细胞 内TLR2mRNA和蛋白表达；LPS预处理也可增强TLR2特异性配体肽聚糖刺激巨噬细胞NO生成的效应；TLR2特 异性中和抗体可部分阻断LPS的致敏效应。LPS可促进 NF—AT转录激活，细胞内钙离子 (ca )螯合剂 BAPTA／ AM和 calcineurin抑制剂 cyclosporinA(CsA)均可阻断LPS的作用 ；BAPTA／AM和 CsA均能显著抑制 LPS的致敏效 应。结论：LPS可以致敏巨噬细胞 ，从而使其在后续HKSa作用下NO生成量增加 ；模式识别受体TLR2和Ca“／cal— cineurin／NF—AT信号转导途径可能参与了LPS的这一致敏效应。 [关键词] 脂多糖类；葡萄球菌，金黄色；一氧化氮；受体，Toll样；钙 ；活化T细胞核因子 [中图分类号] R392 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．06．027 Signalingmechanismsinvolved in theprimingeffectsoflipopolysaccha— rideonStaphylococcusaureus—-inducednitricoxideproductioninmacro． phages HU Jia ，YANGTao ，WANG Bei—lei，NIXiao—xiao ，ZHOUGuo—wu ，NIXin ， ZHUXiao—van (DepartmentofPhysiology，SchoolofBasicMedicalScience，DepartmentofAnesthesiology，ChanghaiHospital，Second MilitaryMedcialUniversity，Shanghai200433，China．E—mail：xiaoyanzhul@yahoo．com．cn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatethesignalingmechanismsinvolvedintheprimingeffectsoflipop0lysaccharide (LPS)onheatkilledStaphylococcusaureus(HKSa)一inducednitricoxide(NO)productioninmacrophages．METH- oDS：MurinemacrophageRAW264．7wasusedintheexperiment．Griessreagentwasusedtomeasurethecontentofni． triteinculturemedium．Real—timePCR andWesternblotwasutilizedtoexaminethemRNA andproteinlevelsoftoll— likereceptor2(TLR2)，respectively．Dualluciferasereporterassaywasus