人心肌干细胞的体外改良培养.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(2)：381-384 · 381 · [文章编号] 1000-4718(2013)02-0381-04 · 实验技术 · 人心肌干细胞的体外改良培养 胡圣大， 马根 山 ， 姚玉宇， 陈中璞， 严凤娣 (东南大学附属中大医院心内科 ，江苏 南京 210009) [摘 要] 目的：用改良的培养基培养人心肌干细胞，并筛选鉴定。方法：通过心脏外科手术取下右心耳组 织 ，用组织块培养法来获得原代心肌干细胞 ，用改良的心肌干细胞培养液培养，增殖传代后进行心肌干细胞表面标 志物的鉴定 ，再用免疫磁珠筛选以获得较纯的目的心肌干细胞。结果：培养约2周后，贴壁 良好的心肌组织块周围 可见有小、圆、亮的细胞爬出，用Accutase(细胞消化液)短时间消化后冲洗细胞 ，培养增殖传代 ，其增殖能力与传统 心肌干细胞培养液培养的细胞 比较无显著差异 ，用流式细胞术鉴定 c-Kit(干细胞表面标志物)，其阳性率(6．84- 2．1)％，之后用含抗c—Kit抗体 (anti—C—Kit)的磁珠进行分选，即得较纯的c—Kit阳性(c—Kit)心肌干细胞 ，它们可以 分化为心肌细胞。结论：通过心脏组织块贴壁培养法，用改 良后的心肌干细胞培养基培养，再借助免疫磁珠的分 选，同样可得到较纯的c．Kit心肌干细胞。 [关键词] 心肌干细胞；流式细胞术；磁珠分选 [中图分类号] R542．22 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．02．035 Cultureofhumancardiacstem cellswithimprovedcardiosphere-growing medium ／nvitro HU Sheng—da，MA Gen—shan，YAO Yu—yu，CHEN Zhong—pu，YAN Feng-di (DepartmentofCardiology，theAffiliatedZhongdaHospitalofSoutheastUniversity，Nanjing210009，China．E—mail：mn— genshan@hotmail．com) [ABSTRACT] AIM：Toprepareanimprovedmediumforculturinghumna cardiacstemcells．METHODS：The heartsamplesofthefightauricleobtainedfromthepatientsaftercardiacsurgeryweremincedintopieces(about1mm×1 mmx1mm)，digestedandcultured．Theprimarycellsobtainedwereculturedwithimprovedcardiosphere·growingmedium (CGM)ofrproliferation，andthecellswereidentifiedbyflowcytometry．Finally，purerc-kit cellswereobtainedbythe methodofmagneticbeadsorting．RESULTS：Afterabout2weeksofculture，small，roundandphase—brightcellsmigrated from thewell-adherentexplantsoveralayeroffibroblast—likecells．ThesecellswerecollectedbyabriefdigestionwithAc- cutase，washedandculturedwithimprovedCGM．Nosignificantdifferenceoftheproliferativecapacit