人血管细胞中hCREG1基因启动子对血清饥饿发生应答.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(8)：14 二 · 1483 · [文章编号] 1000—4718(2008)08—1483—07 人血管细胞 中hCREG1基因 启动子对血清饥饿发生应答 韩雅玲， 赵 昕， 闰承慧 康 建， 张效林， 邓 捷 ，徐红梅 ， 刘海伟 (沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科，辽宁沈阳110016) [摘 要] 目的：为揭示E1A激活基因阻遏子 (CREG1)在人血管平滑肌细胞(VSMCs)和人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)中表达的调控机制，构建人CREG1(hCREG1)启动子报告基因载体，探讨 CREG1在不同血管细胞中的 表达。方法：在对 hCREG1进行生物信息学分析的基础上，以人基因组 DNA为模板 ，PCR方法扩增含有hCREG1 基因上游一3677bp序列，构建了hCREG15上游一3677bp、一2310bp和一945bp序列片段，分别将这3个序列 克隆到pMD18一T载体上并定向亚克隆到pEGFP一1报告基因载体 一pEGFP—hCREG1一P3677、pEGFP—hCREG1 一 P2310和pEGFP—hCREG1一P945。将重组质粒瞬时转染 VSMCs株 HITASY和HUVECs，检测绿色荧光蛋 白 (GFP)的表达。结果：经测序鉴定证实，3个报告基因载体中插入的PCR扩增序列均与hCREG1基因上游DNA序 列完全匹配。瞬时转染体外培养的人VSMCs和 HUVECs后，经荧光观察和蛋白质印迹 (Westernblotting)证实，细 胞内存在GFP的表达，并且0．5％FBS培养的HITASY细胞中GFP表达较 10％FBS培养的细胞中明显增加。HU— VECs中的GFP表达较人VSMCs明显增加。结论：hCREG1基因启动子报告基因载体构建成功，核心启动子存在 于5上游序列的一945bp一0bp区域，为进一步研究hCREG1基因表达提供了条件。 [关键词] 启动区(遗传学)；阻遏蛋 白质类；基因，hCREG1 [中图分类号] R363 [文献标识码] A ResponseofCREG1 promoter to serum starvation in human vascular cells HANYa—ling，ZHAO Xin，YAN Cheng—hui，KANGJian，ZHANG Xiao—lin，DENG Jie，XUHong—mei，LIUHai—wei (DepartmentofCardiology，CardiovascularInstituteofPLA，ShenyangGeneralHospital，Shenyang110016，China．E— mail：hanyal@ma il．sy．In．cn) [ABSTRACT] AIM：InordertoexploretheregulatorymechanismsofthehumancellularrepressorofE1A—stim— ulatedgenes(hCREG1)invasculrasmoothmusclecells(VSMCs)一HITASYandinhumna umbilicalveinendothelial cells(HUVECs)，wecloneandconstructhCREG1promotervectortodetectitsexpressionindifferentvasculra cells． METHODS：Withtheresultsofbiological information，thefragmentsincluding 一3677bp， 一2310bpna d 一945bp upstream sequence