内质网应激在Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(12)：2121-2127 · 2121 · [文章编号] 1000-4718(2013)12—2121．07 内质 网应激在 Bim介导缺氧 致心肌细胞凋亡中的作用 夏 珍， 李菊香 ， 丁 浩， 孙国芳， 洪 葵， 吴延庆， 程晓曙 (南昌大学第二附属医院心内科，江西省分子医学重点实验室，江西 南昌330006) [摘 要] 目的：探讨内质网应激在 Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡中的作用。方法：在体外原代培养 出生 1～3d；k鼠心肌细胞，并用抗OL-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。设计并化学合成3对靶向bim的siRNA，用 脂质体法将 siRNA转染心肌细胞 ，筛选沉默效率最高的 siRNA。实验分组：(1)空白对照组；(2)缺氧组；(3)缺氧 +脂质体组；(4)缺氧+阴性对照siRNA组；(5)缺氧+Bim—siRNA组。MTr法观察细胞活性；流式细胞术检测细胞 凋亡率及细胞内钙离子浓度变化情况 ；Westernblotting检测内质网应激标志分子caspase212和三磷酸肌醇(IP)的 表达情况。结果：免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功。在荧光显微镜下，转染了阴性对照siRNA组的 细胞中观察到绿色荧光，即转染成功；Westernblotting结果显示，Bim-siRNA转染均能有效降低 Bim蛋白的表达，其 中第2对沉默效率最高，达到86．73％。缺氧损伤导致心肌细胞活性明显下降(P0．05)，转染Bim—siRNA后细胞 活性较阴性对照组升高。缺氧细胞凋亡率较对照组明显增加 (尸0．01)，细胞内钙离子浓度明显增高，而沉默 bim 的表达能降低细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度。缺氧导致内质网应激标志分子caspase．12和I 表达较空白对照 组明显上调(均P0．05)，而抑制Bim表达后caspase-12和IP3表达明显降低。结论：沉默bim的表达能有效抑制 缺氧导致心肌细胞凋亡的作用 ，内质网应激标志分子 caspase一12和 I 可能参与了Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡 的过程。这有望为临床心肌缺血缺氧损伤的治疗提供新思路。 【关键词] Bim蛋白；siRNA；内质网应激；缺氧；细胞凋亡 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．12．002 Role ofendoplasmic reticulum stress in Bim-mediated cardiomyocyte apoptosisinducedbyhypoxia XIAZhen，LIJu—xiang，DINGHao，SUNGuo—fang，HONGKui，WUYan—qing，CHENG Xiao．shu (DepartmentofCardiology，theSecondAffiliatedHospitalofNanchangUnwe=ity，JiangxiProvincialKeyLaboratoryofMo— lecularMedicine，Nanchang330006，China．E：mail：q~912@126．com) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheroleofendoplasmicreticulums~ess(ERS)intheprocessofBim-media— tedcardiomyocyteapoptosisinducedbyhypoxia．METHODS：CardiomyocytesWereisolatedfrom neonatM SpragueD‘awley ratsaged1～3days．andprimarilyculturedinvitro．Theantibodytargeting仅一striatedmuscleactinwasusedtoidentifythe cardiomyocytes．ThesiRNAstargetingbim