巨噬细胞集落刺激因子及其受体mRNA在人卵泡颗粒细胞和胎盘及子宫内膜中的表达.pdfVIP

维普资讯 · 1850· 主国痘理生理盘圭 hi 』 ofPathophysiology 2007，23(9)：1850—1852 [文章编号] 1000—4718(2007)09—1850—03 巨噬细胞集落刺激 因子及其受体 mRNA在人卵泡 颗粒细胞和胎盘及子宫内膜中的表达 张武文， 黄丽丽 ， 庄亚玲， 王 雯 (浙江大学医学院附属妇产科医院，浙江 杭州 310006) [摘 要] 目的：观察巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)及其受体 (MCSFR)在人卵泡颗粒细胞、胎盘及子宫内 膜细胞中的表达情况，进一步了解它们在生殖生理中的作用。方法：收集人卵泡颗粒细胞 、胎盘及子宫内膜细胞标 本。采用逆转录一聚合酶链式反应 (RT—PCR)及原位逆转录一聚合酶链式反应(insituRT—PCR)技术观察MCSF 及MCSFRmRNA的表达情况。结果：在人卵泡颗粒细胞、胎盘及子宫内膜细胞中，RT—PCR显示有MCSF及MCS． FR的表达，原位RT—PCR也进一步证实了这一点 ，并定位于细胞浆。结论：MCSF可能参与了人卵泡颗粒细胞 、 胎盘及子宫内膜细胞生长、发育的调节，在生殖生理过程中可能起一定的作用。 [关键词] 巨噬细胞集落刺激因子；受体 ，巨噬细胞集落刺激因子 ；颗粒细胞；子宫内膜；胎盘 [KEYWORDS] Macrophagecdony—stimulatingfactor；Receptor，macrophagecolony—stimulatingfactor；Gran— ulosacells；Endometrium；Placenta [中图分类号] R363 [文献标识码] A 巨噬细胞集落刺激 因子 (macrophagecolonystimulation 术时获得。用于RT—PCR的胎盘与子宫内膜立即置于液氮 factor，MCSF)能与受体 (MCSFreceptor，MCSFR)亲和结合而 中，一80％保存。用于insituRT—PcR的胎盘与子宫内膜立 发挥多种生物学效应，具有促进单核巨噬细胞的生存、分化 ， 即固定于 10％的甲醛溶液中，室温24h后进行常规脱水，包 以及调节雌性生殖道细胞等功能。MCSFR是原癌基 因 埋，制成切片。 c一 产物 ，它是一种跨膜蛋 白…。近几年来，有研究表明 3 RT—PCR检测 MCSF在女性生殖生理中可能存在一定的功能 。也有研究 采用Trizol抽提颗粒细胞 、胎盘及子宫内膜的总RNA，并 发现，对缺乏 MCSF基因的OP／OP小鼠注射 MCSF，该类小鼠 行甲醛变性凝胶电泳，紫外分光光度仪测吸光度 (A)值，以确 动情周期能够恢复正常，并且排卵率升高，颗粒细胞 的增殖 定 RNA完整性及含量。分别取2I．Lg总RNA进行逆转录后 能力也增加。蜕膜化的人子宫内膜基质细胞与蜕膜 CD56 各取2 行 PCR反应。MCSF引物 ：上游 5’一CTCTCCG— 细胞能表达 MCSF，但是其具体的功能了解甚少。MCSF和 CATCCCAGGAC一3’，下游 5’一CACTCCCAATCATGTGGCTA MCSFR在人卵泡颗粒细胞、胎盘及子宫内膜细胞中的表达情 一 3’，产物为255bp。MCSFR引物：上游5’一TGTGAAGTG— 况，目前 尚未见报道。本研究利用insituRT—PCR及 RT— GATGGCCCC一3’，下游 5’一CTCCTGAAGGAAGGAGCAGA一 PCR方法，观察 MCSF和MCSFR在人卵泡颗粒细胞、胎盘及 3’，产物为260bp。反应条件 ：95oC预变性 15min。扩增35 子宫内膜细胞中的表达情况，进一步探讨 MCSF及其受体在 个周期：94℃ 60S，56oC(MCSF)或51℃(MCSFR)60S， 人类生殖生理中的作用。 72℃60S，72oC延伸5min。取 13 LPCR产物在2％琼脂 糖凝胶