后肾细胞微环境诱导胚胎干细胞向肾系细胞分化的实验研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiologv 2011，27(1)：129—133 · 129 · [文章编号】 1000—4718(2011)01—0129—05 后肾细胞微环境诱导胚胎干细胞 向肾系细胞分化的实验研究术 汪 泱 ， 张立行，王共先， 谢 安， 娄远蕾， 阮琼芳， 崔苏萍，杨 阳 (南昌大学泌尿外科研究所，江西 南昌330006) [摘 要] 目的：探讨胚胎后肾细胞微环境诱导胚胎干细胞(ESCs)分化为肾系细胞的作用。方法：小鼠D3 系胚胎干细胞通过悬滴法制备拟胚体 (EBs)，将EBs细胞与取 自孕 l2．5d小鼠胚胎的后肾细胞通过间接共培养以 诱导其分化，即为共培养诱导组 ，设EBs细胞 自然分化为对照组；采用免疫荧光染色法检测共培养第3、5、7d后的 EBs细胞Pax2、WT一1蛋白表达情况，通过逆转录PCR法检测诱导3d后的EBs细胞 Pax2、WT一1、Liml、Salll、 Emx2、GDNF、Wnt4、BMP7、Nephl、Nephrin、KSP和CD24mRNA的表达情况。结果：EBs细胞在诱导的第3d即出现 了全部肾发育相关基因的表达，其中共培养组Pax2、wT一1、Emx2、GDNF、Nephl、Nephrin、KSP和CIY24的表达强于 对照组 ；免疫荧光结果显示在诱导3d后的EBs细胞中可观察到 Pax2阳性细胞，阳性细胞数在共培养第5、7d增 多；诱导5d后可观察到wT一1阳性细胞，对照组未见Pax2或 ～1蛋白阳性细胞出现。结论：后肾细胞微环境 可促进ESCs分化为肾系细胞。 ’ [关键词】 胚胎干细胞；后肾细胞；肾系细胞 [中图分类号] R363 【文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2011．01．025 M etanephriccellmicroenvironmentinducesembryonicstem cellstodif- ferentiatetowardrenalcells WANG Yang，ZHANG Li—xing，WANG Gong—xian，XIEAn，LOU Yuan—lei，RUAN Qiong—fang，CUISu—ping，YANGYang (InstituteofUrology，NanchangUniversity，Nanchang330006，China．E—mail：wang~3cn@sina．corn) [ABSTRACT] AIM：Toexploretheeffectsofmetanephriccellmicroenvironmentoninducingembryonicstem ceNs(ESCs)todifferentiatetowardrenalcells．METHODS：Embryoidbodies(EBs)ofD3mouseembryonicstem cells were prepraedbyhangingdropculture，andtheEBswere co—cultured indirectly withmetanephric cellsderived from El2．5dmouseemb ryo．TheEBscellwithspontaneousdifferentiationwasusedasthecontro1．TheproteinsofPax2and WT一1wereanalyzedbyimmun0nuorescenceassay．ThemRNA expressionofPax2，WTI一1，Liml，Salll，Emx2，GD- NF，Wnt4，BMP7，Nephl，Nephrin，KSPnadCD24geneswasdetectedbyRT— PCR．RESULTS：Thegenesrelatedto kidneydevelopmentwereexpressedintheEBscellsafterC