肝癌Hep3B细胞HLA-G过表达对NK细胞体外杀伤作用的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(4)：613—618 · 613 · [文章编号] 1000—4718(2012)04—0613—06 肝癌 Hep3B细胞 HLA一G‘过表达 对 NK细胞体外杀伤作用的影响术 曾宪成 ， 张 彤 ， 李 华 ， 方天翎。， 聂常富 ， 陈规划 (增城市人民医院普通外科 ，广东 增城 511300；中山大学附属第三医院肝移植中心，广东 广州510630； 。广州医学院第一附属医院肝胆外科 ，广东 广州 510120；郑州大学附属肿瘤医院肝胆外科 ，河南 郑州450003) [摘 要] 目的：探讨肝癌 Hep3B细胞 白细胞抗原一G(HLA—G)过表达对 NK细胞体外杀伤作用的影响。 方法：实验分为正常对照组(无干预措施，Hep3B组)、空载体对照组(转染空质粒，Hep3B—GFP组)和实验组(转 染pEGFP—c1一HLA—G质粒，Hep3B—HLA—G组)。构建 HLA—G真核表达质粒，转染至Hep3B细胞，经G418 筛选 ，建立稳定过表达HLA—G的肝癌Hep3B细胞。Real—timePCR及Westernblotting检测肝癌Hep3B细胞HLA — GmRNA及蛋白质水平的表达。分析肝癌 Hep3B细胞 HLA—G过表达及 HIA—ABC抗体封闭靶细胞相应位点 对NK细胞体外杀伤作用的影响。结果：经酶切及测序鉴定证实，插入序列与设计的序列相符。Real—timePCR 和Westernblotting结果均表明，转染重组质粒的Hep3B细胞 HLA—G过表达 (P0．01)。NK细胞对转染 pEGFP — cl—HLA—G的Hep3B细胞杀伤作用明显降低 (P0．01)，HLA—ABC单抗封闭靶细胞相应位点后，NK细胞对 Hep3B、Hep3B—GFP和Hep3BHLA—G细胞的杀伤均增加 (P0．01)。结论：pEGFP—C1一HLA—G表达载体可 有效增加HI —G表达，HLA—G过表达可以削弱NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应。HLA—ABC单抗封闭靶细胞 相应位点后，NK细胞对靶细胞的杀伤能力普遍有所提高。 [关键词】 人类白细胞抗原一G；基因重组；肝肿瘤 [中图分类号] R730．5 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．40．007 Effect0f0Verexpressi0n0fhuman leukocyteantigen—G inhepatocellular carcinomaHep3B cellsonkillingactivityofNK cells／nvitro ZENG Xian—cheng ，ZHANG Tong ，LIHua ，FANG Tian—ling ，NIE Chang—fu ， CHEN Gui—hua (DepartmentofGeneralSurgery，TheHospitalofZengchengCity，Zengcheng511300，China；LiverTransplantationCen— ter，TheThirdAffiliatedHospital，SunYat—senUnive~ity，Guangzhou510630，China；DepartmentofHepatobiliarySur- gery，TheFirstAffiliatedHospital，GuangzhouMedicalCollege，Guangzhou510120，hCina ；DepartmentofHepatobilairy Surgery，TheAffilaitedTumorHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450003，hCina．E—mail：chgh1955@263．net) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheinfluenceofup—regulationofhumanleukocyteantigen—G (HLA—G) expressioninhepatocellularcar