蛋白酶体功能障碍通过激活P53抑制人骨髓间充质干细胞增殖.pdfVIP

· 2250- 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(12)：2250-2253 [文章编号] 1000—4718l2012)12-2250一o4 蛋 白酶体功能障碍通过激活 P53 抑制人骨髓间充质干细胞增殖：l： 刘雪芹， 宋慧芳， 陆 利 (山西医科大学人体解剖学教研室 ，山西 太原030001) [摘 要] 目的：明确蛋白酶体活性下降导致人骨髓问充质干细胞(hBMSCs)增殖能力降低的机制，探讨P53 在此过程中的调控作用，以期为组织工程提供数量充足且活性优 良的种子细胞。方法：检测早期(第3—4代)与 晚期(≥14代)hBMSCs蛋白酶体活性及 P53表达变化。将早期 hBMSCs分为DMSO对照组、蛋白酶体抑制剂 MG132组 (10i．Lmol／LMG132作用4h)和P53抑制剂pifithrin—oL(PFT— )+MG132组 (20 moL／LP 一 预干 预 1h，随后加入 10 moL／LMG132作用4h)，通过BrdU掺人实验和流式细胞术观察细胞增殖能力及细胞周期分 布。随后将P丌 一d直接作用于晚期hBMSCs，通过 BrdU掺入实验检测 P53抑制剂对晚期细胞增殖能力的影响。 结果：体外培养晚期 hBMSCs伴随蛋白酶体活性降低，P53表达水平较早期细胞上调 16．89％-4-4．44％(P0．05)。 给予MG132能够显著抑制 hBMSCs增殖，BrdU阳性率降低至33．36％4-2．24％(P0．01)；但是若提前给予PFT— ot则能部分拮抗MG132对 hBMSCs增殖能力的影响，BrdU阳性率上升至49．23％-42．67％(P0．05)。流式细胞 术结果显示，P盯 一 +MG132组各期细胞分布与DMSO对照组相似，增殖指数显著高于MG132组(P0．01)。抑 制P53激活能够显著提高晚期hBMSCs增殖能力 ，BrdU阳性率较对照组升高24．73％ ±8．35％(P0．01)。结论： 传代晚期hBMSCs蛋白酶体活性下降可能通过激活P53、影响细胞周期进程进而导致hBMSCs增殖潜能下调。 [关键词] 蛋白酶体；P53；人骨髓间充质干细胞 ；细胞增殖 [中图分类号] 11338 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．12．025 DysfunctionofproteasomeinhibitstheproliferationofhBMSCsviaacti． vationofP53 LIU Xue—qin．SONG Hui—fang．LU Li (DepartmentofAnatomy，ShanxiMedwalUniversity，Taiyuan030001，China．E—mail：luli7300@126．com) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheroleofP53indecreasedcellproliferationandproteasomalactivityduring cultureexpansionofhumna bonema~owmesenchymalstemcells(hBMSCs)．METHODS：Theproteasomalactivityand expressionlevelofP53inearly—passage(passage3～4)and!ate—passage(passage≥14)hBMSCswereobserved．Ear- ly—passagehBMSCsweredividedintoDMSO·controlgroup，MG132group(treatedwith10 m0l／LMG132for4h)and pifithrin一仅(PET—ot)+MG132group(pretreatmentwith20~moVLPFT一 ofr1hthenexposuretoMG132for4h)． Theproliferati