丙型肝炎病毒核心蛋白对HepG2细胞生长周期的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(4)：631—637 · 631 · [文章编号] 1000—4718(2012)04—0631—07 丙型肝炎病毒核心蛋白对 HepG2细胞生长周期的影响 罗 琼 ， 姜 傥 ， 陈 景 ， 肖定璋 (广东省人民医院 血液科 ，医学研究中心，广东 广州510080；。中山大学附属第一医院检验科 ，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：构建丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV—core—lb)真核重组质粒，获得稳定表达 HCV—core一 1b的HepG2细胞株 ，观察 HCV—core—Ib对 HepG2细胞株生长周期及 cyclinD1和pRb／p130表达的影响，探讨丙 型肝炎病毒慢性感染的可能机制。方法：将 HCV—core—lb亚克隆人pBabe—Flag—puro载体，获得重组质粒 pBabe—Flag—HCV—core—lb；将重组质粒转染病毒包装细胞Pheonix293T，筛选获得分泌HCV—core一1b的病毒 包装细胞株。利用包装细胞产生的病毒上清感染靶细胞 ，筛选后获得稳定表达HCV—core—lb的HepG2细胞株， 流式细胞仪检测靶细胞生长周期的变化 ，Westernblotting检测cyclinD1和pRb／pl30蛋白的表达。结果 ：基因测序 确认HCV—core—lb亚型基因编码区完整无移位，与标签蛋白Flag形成融合蛋白。HepG2一HCV—core细胞株成 功表达Flag—HCV—core一1b蛋白，并导致细胞cyclinD1和pRb／pl30的水平下调，显著改变了HepG2细胞生长周 期，使细胞阻滞在G。／G。期。结论：成功构建了pBabe—Flag—HCV—core—lb真核表达质粒，获得稳定表达 Flag — HCV—core—lb融合蛋白的HepG2细胞 。由于 HCV—core一1b蛋白的表达，下调 了HepG2细胞 cyelinD1和 pRb／pl30的表达，显著抑制HepG2细胞生长周期。 [关键词] 丙型肝炎病毒核心蛋白；HepG2细胞；细胞周期蛋白D1；pRb／pl30 [中图分类号] Q78 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．40．010 EffectsofhepatitisC viruscoreprotein on cellcycleofHepG2cells LOUQiong，JIANGTang3，CHENJing，XIAODing—zhang (DepartmentofHematology，ResearchCenterofMedicalSciences，GuangdongProvincialPeoplesHospital，Guangzhou 510080，China；DepartmentofClincialLaboratory，TheFirstAffiliatedHospitalofSunYat—senUnivemity，Guangzhou 510080，China．E—mail：Dzhxiao@ 163．con，JL196462@163．tom) [ABSTRACT] AIM ：ToinvestigatethemolecularmechanismofhepatitisCvirus(HCV)chronicinfectionby studyingtheeffectofitscoreproteinoncellgrowthnadtheexpressionofcellcycleregulatorssucha8cyclinD1andpRb／ p130 inHepG2cells．METHODS：AeukaryotieexpressionvectorthatcarriedageneencodingHCV —core—lbwascon· structed．ThecDNA ofHCV coreproteinwassubclonedintopBabe—Flag—purovectortogeneratepBabe—Flag—HCV—