蛋白激酶R与丙型肝炎病毒核心蛋白相互作用区域定位.pdfVIP

维普资讯 · 24lO· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(12)：2410—2413 [文章编号] 1000—4718(2007)12—2410—04 蛋白激酶 R与丙型肝炎病毒核心 蛋 白相互作用区域定位 颜学兵， 季 芳，傅涓涓， 汪莉萍，梅 蕾， 潘修成，韩方正， 张言超 (徐州医学院附属第一医院感染病科，江苏 徐州 221002) [摘 要] 目的：观察丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(CP)对蛋白激酶R(PKR)表达的影响；定位 PKR与 CP 直接结合的区域。方法：对 Huh一7、转染表达 cP的Huh一7及含有全长HCV复制子 (replicon)Huh一7细胞株的 PKR表达水平及干扰素 (IFN)诱导前后 repliconHuh一7细胞中HCV结构蛋白和非结构蛋白表达水平作比较 ；对 cP与PKR进行免疫共沉淀试验、谷胱苷肽 S转移酶(GST)结合试验。结果：RepliconHuh一7中PKR表达水平高 于Huh一7及转染表达CP的Huh一7；IFN诱导后 PKR表达增加，且明显抑制 HCV结构和非结构蛋白的表达；PKR 能与CP直接结合，依赖于PKR的N端 1—180氨基酸 (aa)。结论 ：CP能直接作用于PKRN端 1—180aa，导致 PKR组成性激活，从而干扰PKR介导的相关信号转导通路。CP与PKR的相互作用是 HCV病毒蛋白与细胞蛋白 相互作用又一新的模式 ，在HCV持续感染及肝癌2者发病机制方面可能起重要作用。 [关键词] 肝炎病毒，丙型；蛋白激酶 R；病毒核心蛋白质类 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Identification ofdomain ofprotein kinaseR interactingwithhepatitisC viruscoreprotein YANXue—bing，JIFang，FUJuan—juan，WANGLi—ping，MEILei，PANXiu— cheng，HAN Fang—zheng，ZHANG Yan—chao (DepartmentofInfectiousDiseases，TheFirstAffiliatedHospital，XuzhouMedicalCollege，Xuzhou221002，China．E— mail：yxbxuzhou@126．tom) [ABSTRACT] AIM：ToobserveifhepatitisCvirus(HCV)coreprotein(CP)influencestheexpressionlevelof proteinkinaseR(PKR)andtomapthedirectinteractiondomainbetweenPKRandCP．METHODS：Theexpressionlev· elsofPKR inHuh一7．Huh一7transfectedwithCPplasmidandrepliconHuh一7harboringselectingfulllengthofHCV genomewerestudied．HCVsturctureandnon—sturctureproteinsinrepliconHuh一7withinterferon(IFN)stimulation werecompared．Co—immunoprecipitationandglutathioneS—transferase(GST)bindingassayweredonebetweenPKR andCP．RESULTS：PKR expressionlevelinrepliconHuh一7washigherthanthatinHuh一7andHuh一7 transfected wiht CPexpressionplasmid．PKR Was increasedbutsturct