人胰岛素样生长因子-1的真核表达及其生物学功能研究.pdfVIP

维普资讯 理生理杂志 ChineseJournalofPathophysioto~ 2007t23(1)：27-29 · 27 · 【文章编号】 1000—4718(2007)01—0027—03 人胰岛素样生长因子 一1的真核表达及 其生物学功能研究 周海斌， 郑祖根， 董启榕 (苏州大学附属第二医院骨科，江苏 苏州215004) 【摘 要】 目的：构建人胰岛素样生长因子 1(IGF一1)分泌型真核表达载体 ，并检测表达产物的生物活性。 方法：用 BT—PCB法从人肝细胞克隆 IGF一1基因，并将其连入 PsecTag／FRT／V5一His载体 ，用脂质体法转染 CHO细胞，将转染细胞上清培养骨髓基质干细胞，用MTr法测定骨髓基质干细胞的增殖情况。结果：成功扩增210 bp的IGF一1基因，表达产物经 SDS—PAGE分析及Weaternblotting检测具有7．7kD特异性条带。骨髓基质干细 胞的增殖随转染细胞上清的浓度 、转染细胞上清培养时间的增加而增加。结论：成功构建分泌型IGF一1真核表达 载体 。其表达产物对骨髓基质干细胞具有促增殖作用。 【关键词】 骨髓间质干细胞；真核表达；CHO细胞；胰岛素样生长因子 I 【中图分类号】 B363 【文献标识码】 A Expressionandfunctionalanalysisoftype-·-1insulin -·-Hkegrowthfactor ZHOUHai—bin，ZHENGZu—gen，DONGQi—rong (Departmentof0r如 h，TheSecondHospitalA~liatedtoSuzhouUnivers~y，Suzhou215004，China．E—mail：zhou- haibins@yahoo．com．cn) [ABSTRACT] AIM_．ToconstructrecombinanthumanIGF一1eukaryotlcexpressionvector。andtostudythehio- logicaleffectofrlGF一1bytransfectinghtevectorintoCHOcells．METHODS：To talRNA WSSpreparedfrom humanliv· er，andIGF一1geneWSSamplifiedbyre、rersetranscriptase—polymeraes chainreaction(BT—PeR)．IGF一1fragment wasinsertedintohteexpressionvectorpSecTag／FRT／V5一Hisnadhtepositiveclonewasverifidebysequencing．Finally， htepositiveplasmidWSStransfectde toCHO cellsbyLipofectamine．Theculturemedium WSS脚1a bySDS／PAGEnad Westernblotting．Th eeffectofrlGF一1onMSCproliferationwasstudide wihthteMTrmehtod．RESULTS：Th eIGF一1 expressionvectorw88constructde nadtransfcetde intoCHO cells．Westernblottingresultsdemonstratde htatrlGF一1W85 epxressedinCHO cells．Th erecomb inantIGF一1promotde MSCSproliferation．CONCLUSION：Wesuccessfullycon- structedhteIGF一1expres