内源性硫化氢在糖尿病肾病病理变化中的作用.pdfVIP

· 2214· 蛔 瘟堡生堡 查 hineseJournalofPathophysiology 2009，25(11)：2214—2216 [文章编号] 1000—4718(2009)11—2214—03 内源性硫化氢在糖尿病 肾病病理变化中的作用 李晓璐 ， 黄 雯， 陈 粜， 张 虹， 杨 敏 (首都医科大学附属北京同仁医院肾内科 ，北京 100730) 【摘 要] 目的：观察糖尿病肾病 (DN)大鼠肾组织中 一平滑肌肌动蛋白(一SMA)分布及含量的变化，探 讨内源性 Hs在糖尿病肾病病理变化中的作用。方法：雄性 sD大鼠28只随机分为：对照组 、DN组、H，S干预组、 胱硫醚一 一裂解酶 (CSE)阻断剂组。采用免疫组织化学法及Western免疫印迹法 ，检测各组大鼠肾脏组织中 — SMA的分布及含量。结果：(1)对照组大鼠肾脏中的Ot—SMA主要存在于血管壁，DN组、CSE阻断剂组除血管壁 外，肾小球系膜区及肾问质均有表达；H：S干预组的DN大 鼠肾脏中仅一SMA的表达与对照组相似，主要位于血管 壁。(2)与对照组比较，DN组中 一SMA的含量增加 [DN组 (40209±935) 对照组 (16028±958)，P0．01]； 与DN组及CSE阻断剂组比较，H2s干预组中 —SMA的含量下降[H2S干预组 (23612±510) DN组 (40 209± 935)、CSE阻断剂组 (39338±l342)，P 0．O1]。结论：内源性Hs可抑制DN大鼠肾脏中成肌纤维细胞的生成， 延缓糖尿病肾病的病理改变。 [关键词】 硫化氢；糖尿病肾病； 一平滑肌肌动蛋白 [KEYWORDS] Hydrogensulfide；Diabeticnephropathies； —smoothmuscleactin [中图分类号] R587．1 [文献标识码] A 新近研究发现，半胱氨酸在胱硫醚一B一合成酶 (cysta— 算相对肾重 (双肾重与体重比，KW／BW)。 thionine—p—synthase，CBS)、胱硫醚 一．y一裂解酶 (cystathi． 3 免疫组化检测 —SMA 的表达 onine一^，一lyase，CSE)和半胱氨酸转移酶催化作用下可产生 切片厚度2Ixm，微波抗原修复。I抗采用小鼠IgG抗大 内源性硫化氢 (hydrogensuflide，HS) ，这种内源性产生的 鼠(购 自武汉博士德公司，1：300稀释)；II抗购 自北京中杉金 S具有松弛血管、抑制血管平滑肌细胞增殖、调节血管平滑 桥生物技术有限公司，PV一6001。滴加 1：4O0II抗 ，室温 肌细胞张力等作用…，其生成减少可能为糖尿病肾病 (diabet- 20min孵育。0．05％DAB显色，镜下控制染色结果。采用 icnephropathy，DN)肾小球病变重要原因之一。本实验通过 AST计算机及Mias一300软件 ，每标本选取 15个 肾小球进行 观察DN大鼠肾脏组织中 一平滑肌肌动蛋白(Ot—smooth 观察，测量每个肾小球中着色的系膜基质面积和整个肾小球 muscleaetin，d—SMA)分布及含量的变化 ，探讨内源性 H，S 面积，以二者的比值表示 目标蛋白在肾小球系膜基质中的相 在DN病理变化中的作用。 对含量。 4 Western免疫印迹检测 仅一SMA的表达 材 料 和 方 法 用RIPA裂解液(含 1×PBS，1％NP一40，0．5％去氧胆酸 1 动物分组及处理 钠，0．1％SDS，用前加PMSF0．1g／L)提取肾组织总蛋 白，考 健康雄性 sD大鼠28只，体重 140—180g，随机分为4 马斯亮蓝测定蛋白浓度，取 100I-rg上样 ，8％SDS聚丙稀酰胺 组，每组7只：对照组 (A组)、DN组 (B组)、HS干预组 (C 凝胶电泳。4℃ 100mA稳流转膜过夜，5％脱脂奶粉室温封 组)、CSE阻断剂组(D组)。B、C、D组 1次性腹腔注射0．1％ 闭1h。I抗采用小