人羊膜上皮细胞体外培养重建角膜上皮的实验研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 201~2，28(4)：689—693 · 689 · [文章编号] 1000-4718(2012)04—0689—05 人羊膜上皮细胞体外培养重建角膜上皮的实验研究 刘小勇 ， 陈 剑 ， 周 清 ， 吴 静 ， 王彦平 ， 金 4， 徐锦堂 ， 贺春香 ， 姚 敏 (暨南大学 。附属第一医院眼科，医学院眼科研究室， 医学院病理生理学教研室，广东 广州 510630；深圳市宝安区人民医院眼科 ，广东 深圳 518101) [摘 要] 目的：探讨人羊膜上皮细胞(humanamnioticepithelialcells，HAECs)诱导分化为角膜上皮细胞的 可塑性及其重建角膜上皮的可行性。方法：取足月产人羊膜 ，通过胶原酶、胰蛋白酶和 EDTA消化获得HAECs，将 细胞在体外培养扩增、传代 ，将2—3代 HAECs接种于去上皮的兔角膜基质上培养，待 HAECs融合形成单层后 ，置 于插入式培养皿中进行气液界面培养 14d。对角膜基质上培养的HAECs用光镜、扫描电镜和透射电镜进行形态 学及超微结构观察 ，以及细胞角蛋白(CK)3／12的免疫组织化学检测。结果：HAECs可在角膜基质上生长，培养 1 ～ 2d可形成单层 ，气液界面培养 14d可形成4～5层细胞的复层上皮 ，扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛，透 射电镜下可见上皮细胞之间有桥粒连接，免疫组化检测复层细胞表达CK3／12，所形成的复层结构与正常角膜上皮 相似。结论：HAECs有可能作为种子细胞用于组织工程角膜上皮重建。 [关键词] 羊膜；角膜；上皮细胞 ；组织工程 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．04．019 Reconstruction ofcornealepithelium by human amnioticepithelialcells cultured ／nvitro LIUXiao—yong，CHENJian，ZHOUQing，WUJing，WANGYan—ping。，JINLing4， XUJing—tang2，HEChun—xiang ，YAOMin (Departmentof Ophthalmology，TheFirstAffiliated Hospital， Department of Ophthalmology，Schoolof Medi- cine，DepartmentofPathophysiology，SchoolofMedicine，JinanUnwe~i@，Guangzhou510630，China；Departmem of Ophthalmoloyg，People’sHospitalofBaoanDistrict，Shenzhen518101，hCina．E—mail：drchenj@163．com) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheplasticityofhumanamnioticepithelialceHsinducedtodifferentiateinto corneal epihtelialcellsandthefeasibilityofcornealepithelium reconstruction．M ETHODS：Apieceofamniotiemembrane takenfrom anuncomplicatedelectivecaesareansectionwas digestedbycollagenase，trypsinandEDTA．Theamnioticepi- thelialceilswereprimarilyculturedandpassagedinDulbecco’smodifiedEagle’smedium containing10％ fetalbovineser-