内外源性结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞胶原合成的比较研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(10)：2057—2059 · 2057 · [文章编号] 1000-4718(2007)10—2057—03 内外源性结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞 胶原合成的比较研究 钱 明 ， 甘卫华 ， 潘晓勤 ， 费 莉 ， 郭 梅 ， 黄艳军 ， 徐颂周 ， 陈荣华 (南京医科大学 儿科研究所，。第二附属医院儿科，江苏 南京 210029) [摘 要] 目的：探讨内外源性结缔组织生长因子(CTGF)对人肾小管上皮细胞(HK2)胶原合成的作用。方 法：将 HK2细胞分为5组：(1)对照组；(2)TGF—p5 g／L刺激组；(3)CTGF5 L刺激组 ；(4)TGF—B 5 g／L 刺激+CTGF反义ODN3mmo~L干预组；(5)TGF—p】5 g／L刺激 +CTGF正义ODN3mmo~L干预组。采用 RT—PCR和Westernblotting检测胶原 letl(ColletI)、胶原 IVdl(ColIVetI)mRNA水平和蛋白水平表达。结果：TGF — p。刺激可使HK2细胞Collet、ColIVetmRNA和蛋白表达显著升高，而CTGF刺激则无此作用，CTGF反义ODN 可拮抗TGF—p 刺激引起 Collet。、ColIVet mRNA和蛋白表达升高，正义ODN无拮抗作用。结论：内源性CTGF介 导了TGF—p。刺激引起的HK2细胞胶原合成，外源性 CTGF对 HK2细胞胶原合成无影响。 [关键词] 结缔组织生长因子；肾小管上皮细胞；胶原 [KEYWORDS] Connectivetissuegrowthfactor；Renaltubularepithelialcells；Collagen [中图分类号] R363 [文献标识码] A ． 肾小管间质纤维化 (tubulointerstitialfibrosis，1rIF)是各种 GGGGCACC一3’，产物347bp。ColIVett上游：5’一CAATGC— 原因造成的肾小管间质病变的最终结果 ，是导致终末期肾功 CCTrCCTGTrCTGC一3’．下游：5’一GTGGACGGCGTAGGCT— 能衰竭的主要原因之一。细胞外基质 (ECM，包括纤连蛋白、 Tc1Tr一3’，产物452bo。GAPDH上游：5’一ACCACAGTCCAT— 胶原 I、Ⅲ和Ⅳ)在 间质的过度沉积是引起 1rIF的直接原 GCCATCAC一3’，—下游：5’一I℃CACCACCCrG1rG(：TGTA一3’， 因…。作为小管间质的固有细胞，肾小管上皮细胞在 ECM 产物452bp。Invitrogen公司合成。 过量沉积中起了重要作用，其中包括促进胶原合成。既往大 2 方法 量研究已经表明转化生长因子BI(transforminggrowthfactor— 2．1 细胞培养和转染 HK2细胞培养于37oC、5％CO 培养 B，TGF—p)是肾小管上皮细胞胶原合成的最有效刺激因 箱，培养基成分包括 DMEMFI2培养基、10％胎牛血清 (FBS)、 子，作为TGF—p 的下游因子，结缔组织生长因子(connective 2．5g／LHepes、1．8g／L碳酸氢钠、青霉素 1×10U／L、链霉素 tissuegrowthfactor，CTGF)对肾小管上皮细胞胶原合成究竟 100mg／L。0．05％胰酶+0．02％EDTA消化后，2×10细胞接 作用如何?至今文献很少报道。所以，本研究旨在对 CTGF 种于50mL塑料培养瓶。70％ 一80％融合时改为无血清 在HK2胶原合成中的地位予以探讨。 DMEM培养24h，使其生长同步化后进行TGF—B刺激，在 含有0．5％FBSDMEM中培养0、3、6、12、24、48h后收集细 材 料 和 方 法