人心肌肌球蛋白轻链基因启动子驱动的GFP和Luc报告基因在人心肌细胞系中的表达.pdfVIP

· 1722 · [文章编号] 1000—4718(2012)09—1722—07 人心肌肌球蛋 白轻链基因启动子驱动的GFP和 Luc报告基 因在人心肌细胞系中的表达米 许秀芳 ， 辛 毅¨， 汪劲松 ， 赵莉敏 ，杜兰萍 ， 葛桂玲6， 李 娜 ， 张 颖。，王世强 ， 黄益民 ， 罗 毅 (首都医科大学附属北京安贞医院，北京市心肺血管疾病研究所 细胞与分子生物学研究室， 实验中心，北京 100029；首都医科大学附属北京儿童医院心外科，北京 100045；北京放射 医学研究所，北京 100850；北京大学生命科学学院，北京 100871；北京中医药大学电镜室，北京 100029) [摘 要] 目的：构建人肌球蛋白2v基因启动子(pMLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和萤光素酶(Lug)报 告基因慢病毒载体并观察其在人心肌细胞系(HCM)和人肺癌细胞株 A549中的整合表达特征。方法：应用去毒化 的人类I型免疫缺陷病毒和pMLC2v—GFP或pMLC2v—Luc报告基因构建慢病毒示踪载体 ，转染 HCM和3．549细 胞，激光共聚焦显微镜及生物发光检测仪观察2种报告基因在不同细胞生长进程中的表达特征。非特异性启动子 驱动的GFP(GFPc)和红色荧光蛋白(RFP)报告基因作为对照。结果：2种细胞转染GFP 和RFP 后第3d，都表 达GFP和 RFP；而HCM只在转染pMLC2v—GFP和pMLC2v—Luc21d后表达GFP和Luc，A549细胞不表达。结 论：pMLC2v主要在培养21d后新增殖的人心肌细胞中驱动GFP和Luc报告基因表达 ，这为监测干细胞向心肌细 胞的分化进程提供了可靠的病理及活体示踪工具。 [关键词] 肌球蛋白轻链；绿色荧光蛋白；萤光素酶；心肌细胞 [中图分类号] 1t54 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．09．035 ExpressionofGFP andLucreportergenesdrivenbyhumanmyocardial myosin lightchain genepromoterinhumancardiomyocytes XUXiu—fang ，XINYi，WANGJin—song4，ZHAOLi—min ，DULan—ping ，GEGui — ling6 LINa ，ZHANG Ying ，WANG Shi—qiang5 HUANG Yi—min ，LUO Yi ， ， (DepartmentofCellularMolecularBiology，ExperimentalCenter，BengAnzhenHospital 地把dtoCapitalMedical Univenity，BengInstituteofHeart，LungBloodVesselDiseases，Bejiing 100029，China；DepartmentofCardiacSur- gery，BeijingChildrenHosptialAffiliatedtoCaptialMedcialUniversity，Being 100045，China；InstituteofRadiatoinMed— icine，Beqng／ 100850，China；SchoolofICeSciences，PekingUniverstiy，Being 100871，China；。DepartmentofEelctron Mciroscope，Beng UniversityofChineseMedciine，Beng100029，hCina．E—r,~／／：luoy1959@yahoo．corn．err) [ABSTRACT] AIM：Toconstructthelentiviralvectorswithgreenfluorescentprotein(GFP)andlueiferase (