内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定.pdfVIP

理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008,24(11)：2191-2194 · 219l · [文章编号] 1000—4718(2008)11—2191—04 内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞特异性 结合肽的体 内筛选及初步鉴定 袁利华，刘承武，姚 琦， 牛茂昌， 李志杰， 邓 鹏， 刘靖华， 姜 勇 (南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室，广东 广州510515) [摘 要] 目的：利用体内噬菌体展示技术筛选能与内毒素休克小鼠肝脏血管特异性结合的短肽。方法：尾 静脉注射噬菌体环七肽库至内毒素休克小鼠体内，循环 10min后，回收肝脏中的噬菌体。将回收的噬菌体扩增、纯 化，并以此为起始物进行下一轮筛选。经过4轮筛选后，将所得文库与正常小鼠做一次差减筛选。随机挑取噬菌 体单克隆进行测序，序列分析后，进行噬菌体的体内回输实验及免疫组化分析，验证所筛得噬菌体克隆的导向情 况。结果：经过4轮体内筛选 ，肝脏中噬菌体回收率逐步提高，证明噬菌体文库在肝脏血管中得到有效富集。DNA 测序后发现，l0条序列中有5条为LTYWAPA，体内回输实验和免疫组化实验均证实表达该序列的噬菌体能有效地 靶向于休克小鼠肝脏血管内皮细胞。结论：筛选到的短肽LrlTWAPA能特异性结合于内毒素休克小鼠肝脏血管内 皮细胞，有可能对内毒素休克的治疗具有重要意义。 [关键词] 噬菌体展示；休克，脓毒性；肝 ；内皮细胞；特异性结合肽 [中图分类号] Q782 [文献标识码] A Invivo screeningand characterization ofpeptidesspecificallybindingto vasculatureendothelialcellsofliverinmicewith septicshock YUANLi—hua，LIUCheng—WU，YAOQi，NIUMao—chang，LIZhi—jie，DENGPeng， LIUJing—hua，jIANGYong (KeyLaboratoryofFunctionalProteomicsofGuangdongProvince，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，Chi一 ，．E—mail：yfiang@fimmu．corn) [ABSTRACT] AIM ：Toscreenpeptidesspecificallybindingtovasculatureofliverinmicewithsepticshock． METHODS：Peptidedisplaylibrarieswereinjectedintosepticshockmicebytailveininjection．Aftercirculatingfor10 min，thephagesfrommouseliverswererecovered，amplifiedandpurifiedfollowingaroutineprotocol，andthenre—injec— tedforthenextroundscreening．Afterscreeningfor4roundsinvivo，htephagelibrarieswereinjectedintonormalmiceby tailveininjectionandthephageswererecoveredbysernmcollectiontosubtractthepeptidesbindingwithendothelialcells ofnormalmice．Thenthephageclonesweresequencedandfurtheranalyzedbybioinofmr atics．Theinterestedphageclones werereinfusedtothemicewithsepticshock，na dappraisedbytiteringthephagedistributioninvi