人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology2008，24(5)：939—944 · 939 · [文章编号] 1000—4718(2008)05—0939—06 人小胶质细胞的分离、纯化、特异 分子表达与吞噬功能研究 黄秀艳 ， 曾耀英 ， 张 彩 ， 朱 斌 (暨南大学组织移植与免疫研究中心 ，广东 广州510632；中山大学附属第一医院妇产科 (黄埔院区)，广东 广州510700；广州市番禺区何贤纪念医院产科 ，广东 广州511400) [摘 要] 目的：探讨人小胶质细胞 (micmglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法，为深入研究小胶质细胞功能 建立一种简便的、稳定的细胞模型。方法：取5个月人工药物引产的胎儿脑组织，将脑组织剪碎、研磨 、过滤 、离心 获取混合胶质细胞悬液 ，用DMEM／F12完全培养基调整细胞密度为2×10cells／L，接种于75cm 培养瓶中(记作 first0d)；7—10d后，进行第 1次纯化。此次纯化采用轻柔摇动法将贴壁不牢的小胶质细胞和少突胶质细胞与底 层的星形胶质细胞分离并转入另一培养瓶继续培养扩增 (记作 second0d)；4—5d后 ，混合的小胶质细胞和少突胶 质细胞汇合成片。采用胰酶一EDTA消化法结合差速贴壁法进行第2次纯化。此次纯化将消化得到的细胞悬液离 心和重悬 ，接种于培养瓶 (记作0h)；2h后，小胶质细胞贴壁生长，少突胶质细胞依然漂浮在培养上清中，此时通过 移走上清以去除少突胶质细胞 ，即得到高纯度的小胶质细胞；运用激光共聚焦显微镜技术 、流式细胞术结合细胞表 面或胞内免疫荧光抗体染色技术检测所分离的小胶质细胞CD45，CD11b和CD68的阳性率，以计算其纯度；通过吞 噬荧光微球评价其吞噬功能；利用胞膜边缘波动 (membraneraffling)现象结合荧光标记的鬼笔环肽染色技术鉴定 其活化水平。结果：我们所分离的小胶质细胞中，98％的细胞表达CD45，CD11b和CD68，并且能够吞噬荧光微 球。结论：我们成功地分离和纯化了人小胶质细胞 ，所得到的小胶质细胞高表达 CIM5，CD11b和CD68分子，并且 具有很强的吞噬功能，为进一步进行其功能和蛋白质组研究奠定基础。 [关键词] 小神经胶质细胞；CD68；吞噬作用 [中图分类号] RB63 [文献标识码] A ‘ Studieson the isolation，purification，specific molecule expression and phagocytosisofhuman microglia HUANG Xiu—yan ，ZENG Yno—ying ，ZHANG Cai，ZHU Bin’ (Institutefor~ssueTransplantationImmunology，．~nanUniversity，Guangzhou510632，China；Departmentof帆 ‘ coloyg andObstetrics。TheFirstAffiliatedHosptial，SunYat—senUniverstiy(Huangpudistrict)，Guangzhou510700，Chi- na；DepartmentofObstetrics，HeXainMemorialHospital(Panyudsitrict)，Guangzhou511400，China．E—mail：tzengyy @jnu．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：Toexploreamethodofisolation，purification，cultureandidentificationofhumanmicroglia． METHODS：Thebraintissuefrom a