人肾小管上皮细胞necroptosis模型的构建.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(12)：2301-2304 [文章编号] 1000—4718(2013)12-2301-40 人 肾小管上皮细胞 necroptosis模型的构建水 蒋 芬 ， 陈源汉。， 梁馨苓 ， 李东风 ， 徐丽霞 ， 谢红萍 ， 胡鹏华 ， 刘双信 ， 史 伟 (南华大学附属第一医院肾内科，湖南 衡阳421001；广东省人民医院，广东省医学科学院 肾内科， 。医学研究中心，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：以体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)为靶细胞，构建肾小管上皮细胞凋亡样坏死 (necroptosis)的模型。方法：采用肿瘤坏死因子仅(tumornercosisfactor ，TNF一)诱导细胞凋亡，同时采用抗霉素 A (antimycinA)耗竭ATP，构建肾小管上皮细胞凋亡的模型，并以caspase一8抑制剂苄氧羰酰一缬氨酰．丙氨酰一天冬 氨酰-氟甲基酮 (benzyloxycarbony1．Val—Ala—Asp-fluoromethylketone，zVAD-fmk)阻断凋亡 ，用 necroptosis的特异性抑 制剂 necrostatin一1(Nec-1)阻断necroptosis，观察细胞在不同的处理下形态学的变化，同时检测细胞存活率及标志物 微管相关蛋白1轻链 3一II(microtubule．associatedprotein1lightchain3．1I，LC3．Ⅱ)的表达。结果：(1)在TNF．+ zVAD-fmk+antimycinA处理 1h时细胞及细胞器膨胀 ，电镜下细胞膜碎裂 ，线粒体变圆、肿胀 ，嵴逐渐模糊，胞浆中 出现大量自噬小体，而Nec一1预处理后细胞的坏死程度较对照组明显改善。(2)在TNF一仅+zVAD-fmk+antimycinA 1h实验组，Nec·1预处理后细胞的存活率显著增加(P0．05)。(3)TNF—et+zVAD-fmk+antimycinA干预 1h实验 组在 Nec一1预处理后 LC3一II的表达量明显下降(P0．05)。结论：凋亡环境中阻断凋亡可以诱导肾小管上皮细胞 necroptosis，抑制剂 Nee一1能特异性阻断肾小管上皮细胞发生坏死。 [关键词] 凋亡样坏死；肾小管上皮细胞 ；微管相关蛋 白1轻链3-II；Necrostatin．1 [中图分类号] R692．5 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000．4718．2013．12．032 A modelofnecroptosisinhumanrenaltubularepithelialcells JIANG Fen ，CHEN Yuan．han ，LIANG Xin．1ing ，LIDong．feng ，XU Li．xia ，XIE Hong—ping ，HU Peng-hua2 UU Shuang-xin ，SHIWei ， (DivisionofNephrology，theFirstAffiliatedHospitalofNanhuaUnive~i@，Hengyang421001，China；DivisionofNeph— rology，MedicalResearchCenter，GuangdongGeneralHospital，GuangdongAcademyofMedcialSciences，Guangzhou 510080。China．E—mail：xinlingliang@139．corn) [ABSTRACT] AIM ：TomakeamodelofnecroptosisinhumanrenaltubularepithelialHK一2cells．METHODS： Toinducenecroptosis，HK-2cellsweretreatedwjm tumornecrosisfactor仅 (TNF-)followedbyATPdepletion，and benzyloxycarbonyl-Val—Ala-Asp—flu