人前列腺特异性膜抗原基因启动子／增强子表达载体的构建及组织特异性鉴定.pdfVIP

维普资讯 · 12O · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(1)：120—123 [文章编号] 1000—4718(2007)01—0120—04 人前列腺特异性膜抗原基因启动子 ／增强子表达 载体的构建及组织特异性鉴定 康鲁东 ，吴伟芳 ， 崔福爱 ， 王秀利 ， 胡晓燕 ， 孔 峰 (’山东大学医学院生化与分子生物学研究所 ，山东 济南 250012；郑州大学一附院骨科 ，河南 郑州450052) [摘 要] 目的：构建前列腺特异性表达的人前列腺特异膜抗原(PSMA)基因启动子／增强子表达载体，并进 行组织特异性鉴定。方法：从人外周血中提取基因组DNA，采用PCR技术分别扩增PSMA上游 1175bp的启动子 序列，及第三内含子中258bp的增强子序列 ，将两个序列定向克隆至荧光素酶报告基因表达质粒pG1．．3一Basic，构 建前列腺特异性表达载体pGL3一PSMP—PSME。将构建载体用脂质体分别转染前列腺癌PC一3M细胞株及4种 非前列腺癌细胞株，48h后通过检测荧光素酶表达活性 ，确定克隆的启动子及增强子的活性及其组织特异性表达 活性。结果 ：构建的pGL3一PSMP—PSME质粒经酶切及 DNA测序分析鉴定，证实克隆片段的大小、插入方向及其 序列正确。细胞转染结果显示，pGL3一PSMP—PSME在PC 一3M细胞株中表达活性明显高于其它4种非前列腺癌 细胞株。结论：构建的前列腺表达载体具有较高的组织特异性，为进一步研究PSMA调控序列驱动治疗基因进行 前列腺癌的靶向生物治疗奠定了基础。 [关键词] 前列腺肿瘤；前列腺特异抗原 [中圈分类号] R737．25 [文献标识码] A Constructionofhuman prostate—specificmembrna ena tigen expression vectorna didentificationoftissuespecificity l(_ANG Lu—dong ，WU Wei—fang ，CUIFu—ai，WANG Xiu—li，HU Xiaoyan ， KONG Feng (InstituteofBoichemiswyandMolecularBiology，SchoolofMedicine，ShandongUniversity，Jinan250012，China； De． pattmentof P口 s，TheFirstA~ tedHospitalofZhengzhouUniversity，Zheng~u450052。China) [ABSTRACT] AIM．Toconstructaprostate—specificexpressionvectorofpromoterandenhancerofhumanpros． tate—specfiicmembraneantigen(PSMA)．METHODS：ThepromoterandenhnacerofPSMAwereamplfiiedbyPCRsep- arately．Th etwosegmentswereclonedintotheexpression vectorpGL3一Basic，aprostate—specificexpressionvector pGL3一PSMP—PSMEwasconstructde ．Th evectorwa8transfectedintoprostaticcarcinomacellPC 一3M andfourkindsof non—prostaticcarcinomacellsbylipofeetamine．Th eactivityoflueiferaseoftransfectedcellsnadtissuespecfiiciytofvector wasexaminde at48hoursaftertransfeetion．RF~ULTS：Wiht DNA sequenceofhtevectorpGL