人清道夫受体SR—AⅠ过表达对293T细胞摄脂和黏附功能的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournal! 巳 ：丝! 2；2!=竺 · l937 · 【文章编号] 1000—4718(2008)l0—1937—06 人清道夫受体 SR—AI过表达对 293T细胞摄 脂和黏附功能的影响术 杨 红， 戴亚蕾 ， 徐 婷 ， 田 菲 (同济大学基础医学院免疫学教研室，上海 200092) [摘 要] 目的：构建重组真核表达质粒 pEGFP—C1一SR—AI在293T细胞上获得高表达，并对A类 I型 清道夫受体 (sR—AI)相应的功能进行鉴定。方法：依据人A类 I型清道夫受体基因MSR1的cDNA设计引物，用 PCR等分子克隆技术构建重组真核表达载体pEGFP—C1一SR—AI，测序证实后，用脂质体法转染293T细胞。用 RT—PCR和Westernblotting检测 sR—AI受体的表达 ，脂质油红O化学染色法检测实验组细胞的脂质摄取量的变 化，通过细胞黏附性实验检测其黏附性的改变。结果：转染后实验组 sR—AImRNA表达及蛋白合成明显高于对 照组和空载体组，同时发现泡沫细胞转化率由对照组和空载体组的 10％显著增加到实验组的20％，且细胞黏附性 也提高2倍以上。结论：成功构建了重组真核表达质粒，并在293T细胞获得了高表达，提高了293T细胞的摄脂能 力和黏附性 ，为进一步研究此受体功能的改变对动脉粥样硬化病理发生过程的影响奠定基础。 [关键词] 受体，清道夫；脂蛋白类 ，LDL；动脉硬化 ；泡沫细胞 [中图分类号] R392 【文献标识码] A EffectofhumanscavengerreceptorSR—A IOVerexpressiOnonuptaking OX．．LDL andadhesionin293T cells YANG Hong，DAIYa—lei，XU Ting，TIAN Fei (DepartmentofImmunology，MedicalCollege，ron~iUniversity，Shanghai200092，China．E—mail：daily@ma il．tongfi． edu．on) [ABSTRACT] AIM：ToconstructtherecombinanteukaryoticexpressionplasmidpEGFP—CI—SR—AIforthe highexpressionin293Tcellsinordertoidentifyfunctionsofsavengerreceptor—A I(SR—A)．METHODS：Theprimer wasdesignedaccordingtoMSRIcDNAandpEGFP——C1——SR ——A 1wasconsturctedbystandardmolecularcloningtech·· niqueandenzymedigestion．Aftersequencing，theplasmidwastransfectedinto293Tcellsbylipidosomemethod．Theex— pressionofscavengerreceptor—A 1wasidentifiedbyRT—PCRandW estern blotting．Theofam cellswereevaluatedbythe formationoflipid granules in the cellswith oilred staining． Celladhesion was analyzed by celladhesion assay． RESULTS：24haftertransfection．SR—A ImRNA washighlyexpressedandthehig【hleveloftheproteinWas detected． Theratiooffoam cellformationwasdoubled，theefficacyofcelladhesionwasenhancedtwotimescomparedtothecontrol rgoupandth