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第37讲 微生物的利用
[考纲要求] 1.大肠杆菌的培养和分离。2.分离以尿素为氮源的微生物。
考点一 微生物的培养相关条件与技术
1.繁殖方式
以分裂的方式繁殖,分裂速度很快,约20_min分裂一次。
2.培养
人们在培养细菌时,需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中,一般用接种环转移带菌的培养物。
3.微生物的培养基
(1)概念:培养基是根据细菌生长繁殖需要的各种营养物质人工配制而成的基质。
(2)类型
划分标准 种类 特点 用途按物理性质分 固体培养基 在培养基中加入凝固剂,有琼脂、明胶、硅胶等 常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面 半固体培养基 在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态 可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面 液体培养基 培养基中不加任何凝固剂 常用于发酵工业按用途分 选择培养基 根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基 培养分离特定的微生物 鉴别培养基 加入某种试剂或化学药品,使培养后会发生某种变化的培养基 区别不同类型的微生物 (3)成分
包含水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等,此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
4.无菌技术
(1)实验操作过程中,应从以下几个方面注意避免外来杂菌的污染:①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁、消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
(2)消毒和灭菌比较
比较项目 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能 灭菌 强烈 全部微生物 能 5两种纯化细菌的方法
(1)划线分离法(方法简单易操作):通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面(也是分离纯化的方法)。在第一次划线后都从上次划线末端开始,目的是获得由单个细菌形成的标准菌落。
(2)涂布分离法(操作复杂,单菌落更易分开):将菌液进行一系列梯度稀释,并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时,即可获得单个细菌形成的标准菌落。
易错警示 关于微生物培养的几个易错点
(1)自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同
①自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物,而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物,因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。
②含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源,也能作为能源物质提供能量,如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。
(2)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项
①倒平板的适宜温度是50 ℃左右,温度过高会烫手,过低培养基又会凝固。
②平板需倒置,这样既可使培养基表面的水分更好地挥发,又可防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。
(3)平板划线操作的注意事项
①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。
②灼烧接种环,待其冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种。
③划线时最后一区域不要与第一区域相连。
④划线用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破。
1.下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基的配方。
试剂 用量 试剂 用量 牛肉膏 5 g 琼脂 20 g 蛋白胨 10 g 水 1 000 mL NaCl 5 g 请回答:
(1)培养基的类型很多,但培养基中一般都含有水、碳源、________、________________和无机盐。
(2)该培养基配制完成后,一般还需调节pH并对培养基进行________处理,实验过程中为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在________________附近操作。
(3)在土壤中分离纯化细菌最常用的方法是______________和________________。在分离纯化前需将菌体放入液体培养基中________________,在固体培养基上划好线后须将培养皿倒置的原因是__________________________________________________________。
(4)实验结束后,使用过的培养基应进行灭菌处理才能倒掉,这样做的目的是________________________。
答案 (1)氮源 生长因子 (2)灭菌 酒精灯火焰 (3)划线分离法 涂布分离法 扩大培养 防止皿盖上的水珠落入培养基中,造成污染 (4)防止造成环境污染
解析 (1)各种培养基的具体配方不同,但一般都含有水、碳源、氮源、生长因子和无机盐。(2)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的污染,培养基配制完成后,需进行灭
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