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生命分析科学专题讲座—— 在通用化学实验室如何开展有关生命科学的研究 方案一：进行生物大分子的分离分析 生命科学的研究已经进入到分子水平，在研究各种生物分子的结构与功能的时候，一个首要的工作就是进行分离提纯以便得到纯的化合物，然后进行相关的分析测试。分离科学尽管已经发展到相当高的水平，常常利用各种先进的高效率的仪器进行微量痕量实时分析。但是在进入仪器分析之前还有许多预处理与分离步骤需要进行，这就要用到普通实验室都可以实现的试剂与设备。另外，在生物样品较大规模的生产制备当中，考虑到成本和经济效益也必须争取实现简单的生产技术，能够在普通实验室就可以完成。 生物大分子主要是指核酸、蛋白质（包括酶和多肽等）、糖类，其分离纯化的方法主要有结晶、沉淀、色谱、毛细管电泳等。常用的沉淀剂有盐类（硫酸铵、磷酸钾、柠檬酸盐、硝酸盐等）、有机溶剂（丙酮、乙醇、葡萄糖、谷氨酸二甲亚砜等）、聚合物类（聚丙烯酸、聚乙二醇、聚丙酮酸乙烯酯、聚乙烯醇等）。色谱法只要有排阻色谱、离子交换色谱、反相液相色谱、增水性相互作用色谱等，具体如何选用要根据欲分离物质的特性（如大小、电荷、活性、溶解性、介质条件等）来进行。 在本例之中介绍一下双水相萃取体系和亲和双水相分配萃取的有关内容以及在生物大分子分离的应用实例。 1. Agueous Two－Phase Extraction：双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种盐溶于同一溶剂（水）时，由于聚合物之间或聚合物与盐之间的不相容性，当聚合物或无机盐浓度达到一定值时，就会分成不互相溶的两相，因待分离物质在两相中的分配比例不同，可以达到分离的目的。（机理尚不清楚） 70年代中首次用于酶和蛋白的提取，以后逐渐扩大了其应用领域，如抗生素、氨基酸、放射性元素等，显示出很好的应用前景。双水相萃取法可以选择性的使细胞碎片分配于双水相系统的下相，而目标产物同时实现目标产物的部分纯化和细胞碎片的除去，因此最有利的应用领域是胞内蛋白质的分离纯化。特点：操作条件温和（常温常压），两相的界面张力小易于分散，易于连续操作处理量大，传质速度快等，尤其用于生物物质分离时对于其活性的保持非常有利。缺点是相（密度差小）分离比较困难。 2. 前面介绍了胞内酶的双水相萃取法，利用偶联亲和配基地PEG为成相聚合物进行目标产物的双水相萃取，可在亲和配基地亲和结合作用下促进目标产物在PEG相（上相）的分配，提高目标产物的分配系数和选择性，这就是亲和萃取，又称为亲和分配（Affinity partitioning）。三步操作即可完成，即亲和分配（进料），杂蛋白质反萃取（清洗）和目标产物反萃取（洗脱）。在反萃取操作中，不同的亲和分配系统和目标产物可采用不同的方法。对于亲磷酸基的酶和静电作用影响较大的亲和体系，可利用磷酸盐溶液进行反萃取。 常用的几种双水相萃取体系： ? Ⅰ相 Ⅱ相 A 聚丙二醇（PPG） 聚乙二醇（PEG） 聚乙二醇，聚乙烯醇 聚乙烯醇，葡聚糖 B DEAE葡聚糖 聚丙二醇，氯化钠 聚乙二醇，硫酸锂 C 羧甲基葡聚糖钠盐 羧甲基纤维素钠盐 D 聚乙二醇 磷酸钾，硫酸铵（钠） 方案二：结合本地特有生物资源进行特异性分析 每一个地区几乎都有一些特有的生物资源，而且即使同类的生物体，也常常由于地区差异表现出特有的一些性质。那么充分利用这些资源研究其特性往往比较简单，代价相对较小。其研究的角度和方法也是多种多样，天然产物领域可以从事分离这些特有资源所包含的特殊物质，生态学可以研究其与环境和其他物种的相互影响，基因科学可以研究其特异基因序列以及地方性疾病的有关内容等。在一般的分析化学实验室进行这方面的研究工作也是有许多角度和方向的，可以依据具体的情形加以确定，也是举几个例子加以说明： 1.微量元素在生命体各部位的含量分布和赋存形态，所作的工作主要是分离富集待测的元素，然后使用ICP，吸光光度法，络合滴定法等测定含量，赋存形态可以使用中子活化分析，凝胶色谱，质谱以及连用技术加以实现。 2.结合我国是中草药的发源地，而且随着医药科学的发展，中草药日益受到重视，国外都加强了相关的研究，相应的中草药现代化是一个迫在眉睫的工作。其中之一就是建立快速高效的复方制剂中的各种有效成分的同时测定，由于已有的各种中草药复方制剂相当繁杂，组方多样，所含成分更是难以尽数，而且仍有许多成分未能知道。综合利用常规化学分析手段以及高效毛细管电泳、液相色谱、流动注射、质谱等现代仪器分析技术就行此项研究将是非常有实际价值的。 3.在我国，地方病分布较广，尤其是对人体危害性较大的地方病相当严重，这些地方病大多数又与微量元素有关。例如，硒缺乏常常是肿瘤、克山病和大骨节病的发病率较高的一个因素，碘缺乏与地方性甲状腺肿和克汀病有直接的关系，氟过多而造成的地方性氟中毒症等。对于这