肇庆学院生命科学学院生物实验技能决赛实验设计书——珍稀药用植物金线莲质量测定的初步的研究.docVIP

肇庆学院生命科学学院生物实验技能决赛实验设计书 参赛作品题目 参 赛 者 资 料 姓名 性别 长短号 XXX 男 XXX 女 XXX 女 XXX 女 珍稀药用植物金线莲质量测定的初步研究 摘要：以金线莲为试验材料, 通过测重法测定生物量与含水量、蒽酮比色法测定可溶性总糖的含量，对评价其质量做初步探讨，同时为金线莲进一步研究与开发提供一定参考意义。 关键词：金线莲 生物量 含水量 可溶性糖 测定 金线莲［Anoectochilus roxburghii(wall.) Lindl］为兰科开唇兰属（Anoectochilus）多年生草本植物，又名花叶开唇兰、金线兰，是我国传统珍贵药材，素有“药王”、“金草”、“神药”和“乌人参”等美称[1]。据研究报道，金线莲中氨基酸组成、成分含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参[2]，且富含有多糖、强心苷类、有机酸、甾体化合物、黄酮类化合物、生物碱等[3-5]等多种成分，广泛应用于风湿性关节炎、高血压、糖尿病、肾病和尿血等症状的治疗，以及病后体虚恢复等方面，被称为“药中之王”[3,4]。此外，金线莲还是的一种室内观叶珍品。目前，金线莲的质量标准尚未被制定，较统一的意见为市售金线莲鲜品、干品多糖均不低于15%（以干基计），黄酮均不低于0.8%（以干基计），干品另外要求水分小于12%[11]。可见，金线莲质量（生物量、含水量及糖的含量等）的测定对金线莲进一步研究有着重要意义。 图1 金线连 1 实验仪器 仪器名称 仪器规格 仪器数量 电热鼓风干箱 CSIOI3型，重庆 1 电子天平（千分之一） YP3001N型，上海 1 电子分析天平（万分之一） AE240型，常州 1 低速台式离心机 TDL-6013型，上海 1 离心管 10 mL 1 容量瓶 25 mL 3 称量纸 —— 10 封口保鲜袋 —— 5 数显恒温水浴锅 HH-4型，常州 1 可见分光光度计 722S型，上海 1 移液器 5000 μL，1000 μL，200 μL 3 烧杯 500 mL，250 mL，100 mL 5 三角烧瓶 100 mL 3 量筒 100 mL，10 mL 1 比色皿 1 cm 8 试管 15×150 10 玻璃棒 —— 1 试管架 —— 1 吸水纸 —— 1 擦镜纸 —— 1 2 实验材料及试剂（试剂浓度等在第一栏注明） 名称（浓度） 数量 材料 新鲜金线莲植株（自备） 50.0 g 试剂 80%乙醇（V/V，分析纯） 100 mL 80%浓硫酸（V/V，分析纯） 100 mL 蒽酮试剂（2.0 mg/mL，分析纯） 100 mL 标准葡萄糖溶液（200 μg/mL，分析纯） 100 mL 蒸馏水 500 mL 3 实验目的 本实验旨在对金线莲的质量进行测定，通过实验掌握植物生物量与含水量的测定方法[6]，理解并掌握蒽酮法测定可溶性总糖含量的原理与方法[7-8]，为进一步研究做好铺垫。 4 实验原理 4.1 生物量与含水量的测定 狭义的生物量是用生物的重量表示，可以是鲜重或干重。考虑到金线莲作为中药材即可鲜草出售，又可干草出售，故此，既测其鲜重，又测干重。利用水遇热蒸发的原理，加热使植株内的水分蒸发，测出干重，即又可测含水量[6]。 4.2 可溶性糖的测定 可溶性糖在浓硫酸作用下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色衍生物，在620 nm处有最大吸收峰。在一定范围内（≤150 μg/mL），颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于可溶性糖的定量[7-8]。 图2 反应原理 图3 糠醛衍生物溶液的吸收光谱 5 实验方法及步骤 5.1试剂的配制 蒽酮试剂：称取0.200 g蒽酮溶于100 mL的硫酸溶液（在30 mL蒸馏水中缓慢加入76 mL比重为1.84的浓硫酸），即得2.0 mg/mL的蒽酮试剂，贮于棕色瓶内，冰箱保存，最好当日配制使用； 标准葡萄糖溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100 mg，溶于蒸馏水，并稀释至500 mL，即为200 μg/mL的标准液。 5.2材料的处理 取新鲜金线莲地上部分，弹去尘土（若表面有污物，需洗净，再用吸水纸吸去表面水分），分为三组，并分别标记为A1、A2、A3，放在称量纸上迅速称鲜重（FW）；将上述材料放入信封中，做好标记，放入烘箱，在105℃下杀青30 min，然后将温度调到65℃烘至恒重，时间在10 h左右；取出烘干的材料，称量干重（DW），以上结果记录于表1；将干样品研碎、过60目筛，妥善保存，供后续测定。 5.3