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p120ctn 亚型在肺鳞癌、腺癌中表达及意义1 苗原，刘洋，王恩华 中国医科大学基础医学院病理学教研室，沈阳 (110001) E-mail ：wangeh@ 摘 要：目的探讨p120ctn 亚型在肺鳞癌、腺癌中的表达及其与各临床病理因素的关系。方 法 采用免疫荧光和Western Blot 方法检测肺鳞癌、腺癌及对应癌旁正常肺组织中p120ctn 各 亚型的表达情况。结果 与正常肺组织相比，p120ctn 在肺癌细胞膜表达减弱,呈现胞膜荧光不 连续或缺失，胞浆内存在p120ctn 的蓄积。正常肺组织中p120ctn 总蛋白量明显高于肺癌组织 （P ＜0.001 ）。p120ctn 蛋白以亚型 1(120KD)和亚型3 （100KD ）表达为主，而在肺癌组织则 出现1、3 亚型表达缺失或减弱（P=0.001, P ＜0.001 ）。并且亚型3 的这种缺失或减弱的现 象与肺癌的淋巴结转移负相关（P=0.005 ）。结论 p120ctn 亚型1 和3 的蛋白表达的减弱或缺 失是肺癌的普遍现象，且这种现象与淋巴结的转移相关。 关键词：p120ctn 亚型，肺癌，免疫荧光，Western Blot 中图分类号：R361 p120ctn 作为连环素家族的新成员，在细胞黏附和信号转导中起着至关重要的作用 [1-4] 。 它的基因有 21 个外显子，根据其剪切的不同，理论上 p120ctn 可产生 32 个亚型，所有的亚 型都具有相同的犰狳(Armadillo)重复序列，只是 C 端或 N 端不同[5] 。根据其起始翻译密码的 不同人类的 p120ctn 可分为 4 种亚型，但各亚型的生物学功能至今尚未阐明[6,7] 。目前p120ctn 在人肺癌中的研究很少，其在肺癌中表达的亚型种类及表达情况仍不清楚。本研究采用免疫 荧光和 Western Blot 方法，观察了 p120ctn 及其各亚型在肺鳞癌、腺癌中的表达及意义，并探 讨其与肺癌的临床病理因素的关系。 1. 材料与方法 1.1 材料 50 例原发性肺癌及对应癌旁正常肺组织来自 2003 年 11 月至2004 年 9 月在中国医科大 学第一附属医院行外科手术切除的新鲜标本。 患者术前均未接受过放化疗。标本取出后立 即放入-70℃冰箱保存备用。其中男 37 例，女 13 例，平均年龄 59 岁（32-78 岁）。按 2004 年 WHO 肺肿瘤组织学分类标准[8]，鳞癌 15 例，腺癌 35 例；高分化 12 例，中分化 23 例， 低分化 15 例；有淋巴结转移 22 例，无淋巴结转移 28 例。依据国际抗癌联盟(UICC)1999 年 修订的肺癌 p-TNM 分期标准[9] ： Ⅰ期 13 例，Ⅱ期 10 例，Ⅲ期 27 例。 1.2 方法 1.2.1 冰冻组织切片和免疫荧光染色观察 取新鲜肺癌和癌旁正常肺组织标本 OCT 包埋，快速冷冻后制成 5µm 厚的切片，贴附于 涂有多聚赖氨酸的载玻片上，冷丙酮固定 10min 后晾干备用。 固定后的冰冻组织切片用0.2% Triton X-100 处理 15min。正常非免疫动物血清37℃孵 育 30min 。滴加p120ctn 鼠抗人单克隆抗体（1:400，BD Transduction Laboratories ），4 ℃孵育 过夜。磷酸盐缓冲液（PBS ）冲洗，每次 5min，重复三次。滴加罗丹明标记羊抗鼠荧光标 记二抗（1:200，北京中杉），37℃孵育 30 分钟。PBS 冲洗，每次 5min，重复三次。DAPI (1:200 ， 1 本课题得到国家自然科学基金和教育部博士点基金(20040159008)资助。 - 1 - SIGMA 公司)核复染 30min ；PBS 冲洗；50%甘油封片，荧光显微镜于波长为 527nm 处观察 罗丹明荧光强度,于 372nm 波长处观察 DAPI 的荧光染色,确定 p120ctn 的表达及定位。 1.2.2 Western Blot