枸杞花药线粒体分离纯化方法.pdfVIP

分子植物育种，2013年，第 11卷，第3期，第43卜436页 MolecularPlantBreeding，2013，Vo1．11，No．3，43卜436 技术主题 TechnologyFeature 枸杞花药线粒体分离纯化方法 林佳 尹晓雯 郑蕊 章英才 徐青 宁夏大学生命科学学院，银川，750021 通讯作者，xuqing08@163．tom 摘 要 为了获得高质量的枸杞花药线粒体，本文介绍了一种差速离心分离纯化枸杞花药线粒体的方法。 通过JannusGreenB显色反应、线粒体跳动特性以及 电镜观察鉴定，结果表明采用本差速离心法提取的线粒 体纯度高、活性强、结构完整。进一步通过琼脂糖 电泳、光密度值及核特异引物PCR检测表明，由该线粒体裂 解的mtDNA不仅纯度高、质量好，而且得率高。本差速离心法具有简捷、高效和经济等优点。用该方法获得 的线粒体完全能够满足线粒体基因组、蛋白质组等相关分子生物学研究要求。 关键词 枸杞，花药线粒体，分离纯化，方法 A MethodofExtracting andPurifying AntherMitochondria in Lycium barbarltm L． LinJiag YinXiaowen ZhengRui ZhangYincai XuQing CollegeofLifeScience，NingxiaUniversity，Yinchuan，750021 Correspondingauthor，xuqing08@163．com DOI：10．3969／mpb．0l1．000431 Abstract Inordertoobtainhighqualityanthermitochondria，thispaperintroducesamethodofextractingna4 purifyinganthermitochondriainLycium barbarltmL．bydifferentialcentrifugation．Theresultsshowedthatmito— chondriaofusingthemethodextractingarepure，s~ongactiviytandcompletestructurebytheJannusGreenB staining，beatingcharacteristicsofmitochondrianadidentificationofelectronmicroscopy．Andfurthermoreresults showedthatmtDNA fomr themitochondrianotonlyarehighpuriytandgoodqualiyt，butalsohighyieldthrough thedetectingoftheagarosegelelecrtophoresis，opticaldensiytnadnuclearspecificprimerPCR．Itindicatesthat thismethodhaseasy，quick，efficientandeconomicadvantages．An dthemitochondfiaofusingthemethod extractingcan completelymeettheresearchrequirementsofthemitochondrialgenome，proteomeandother relatedmolecularbiologyexperiment． Keywords Lycium barbarttmL．，An thermitochondria，Exrtactingandpurifying，M ethod 线粒体是真核细胞进行能量代谢的一种重要细 体较黄化苗线粒体能更好反应不育基因的表达(王学 胞器，在细胞新陈代谢和生物能量转换中处于中心 德，2000)。所以，建立高效提取高纯度且完整的花药 地位 。近年来研究表 明，线粒体基因组还是一种重 线粒体的方法是进行线粒体细胞质雄性不育分子生 要的细胞核外基因组，与植物细胞质雄性不育有关， 物学研究的必要途径。目前分离纯化线粒体大多是 是细胞质雄性不育基因的载体(Boeshoreeta1．，1983； 从黄化苗或愈伤组织，利用差速离心法，差速离心结 1985)，其分子 内或分子间频繁重组所形成的异常嵌 合蔗糖衬垫法、或结合蔗糖密度梯度、或结合氯化铯 合基因是细胞质雄性不育产生的分子基础。此外，花 密度梯度超速离心法等，但这些方法各有优缺点(唐 药与植物细胞质雄性不育息息相关，而且花药线粒 群等，2005；谭才邓，2007；