胡萝卜和烟草原生质体的低温保存LowTemperatureStorageoftheProtoplastsofCarrotandTab.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)19(6):18一201997 胡萝 卜与烟草原生质体的低温保存 赵世民 徐金相 刘根齐 （中国科学院遗传研究所，北京 100101) 刘承宪 李雪梅 （中国科学院上海植物生理研究所，上海 200031) 摘 要 在较长的时间内，可保持正常生理状态与细胞活性的原生质体的制备及保存技术是进行空间细胞 融合实验的前提条件。本研究以0.7ml/L的葡萄糖作渗透压，在6-8℃低温条件下经过72小时保存后， 供试原生质体的存活率仍可达81%，并保持了其长壁与分裂的特性。 关键词 胡萝 卜，烟草，原生质体，低温保存 LowTemperatureStorageoftheProtoplastsofCarrotandTabacco ZhaoShimin XuJinxiang LiuGenq (InstituteofGenetics,TheChineseAcademyofSciences,Beijing100101） LiuChengxian LiXuemei (ShanghaiInstituteofPlantPhysiology,TheChineseAcademyofSciences.Shanghai200031) AbstractStoragedurationandacativityofisolatedprotoplastsareimprotantproblem forexperiment onplantcellfusioninspace.Wehaveachievedprehiminarysuccessusingglucoseasosmoticreagent.The survivalprotopastsafter72hourstoragein0.7mol/Lglucoseat6一8Creached81％andmaitameda veryhighactivityofdivision. Keywords Carrot,Tobacco,Protoplasts,Lowtemperaturestorage 为了在微重力条件下进行植物原生质体融合，从制备出原生质体到人轨需要有一定的等待时间，因而需要原生 质体在这段时间内保持其原生质体状态，不形成或减慢形成细胞壁，并保持原生质体的活力。早在70年代末， Withers和Street首次做了胡萝 卜原生质体的超低温保存，他们所使用的保护剂为5%DMSO，经一196℃液氮保 存后，原生质体的成活率高达90%。此后，多种植物的原生质体超低温保存获得了成功，而且经过合适的培养获得 了再生植株。如胡萝 卜、颠茄、烟草、曼陀萝等。张士波、钱迎倩在植物原生质体培养一书中对此做了详细的论 述。但是利用超低温保存的方法，处理过程长而复杂，不适合于微重力实验，尤其是空间微重力实验．为此，本文 进行了胡萝 卜和烟草原生质体的低温条件下保存研究。 1胡萝 卜原生质体的低温保存 1.1材料 市售新鲜未受冻的胡萝 卜肉质根，用塑料袋包装置于6-8℃冰箱中保存待用。＿以70％乙醇将胡萝 卜肉质根表 面灭菌1一2秒，再用 1%0升汞表面灭菌 10分钟后，用无菌水冲洗3次。在无菌条件下切成 1毫米厚薄片，进行酶 解。 6期 赵世民等：胡萝 卜与烟草原生质体的低温保存 19 酶液6mmol／LCaCl2·2H20,0.7mmol／LNaH2p04,0.7mol／L甘露醇，1％纤维素酶，0.5％果胶酶。 洗液：6mmol/LCaC12·2H20,0.7mmol/L甘露醇，pH5.6. 保存液：a液：0.7mot/L蔗糖，1Ommol/LCCa2l ·2H20,pH5.6. CK:MS培养基附加2mg/L2,4-D,0.7mol/L甘露醇，pH5.6. 1.2方法 胡萝 卜薄片在25℃暗中酶解20.24h，用400目镍丝网过滤，离心收集原生质体，用洗液2次洗涤后，再用 0.7mol/L蔗糖漂浮，