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H eilongjiang Anmi al cience
108 and VeterinaryM edicine 4 2011
ORF5
1 1 2
孙 婕 , 尹国友 , 王玉君
( 1. , 467044; 2. , 150069)
: 828 : B : 1004- 7034( 2011) 04- 0108- 02
( porcine reproductive and 10 LRNA 1 L, dNTP
resp iratory syndrome, PRR ) 4 L, RNA 0. 5 L, AMV 1 L, 5 AMV
( PRR V ) Buffer 4 L, 42 1 ~ 2 h, cDNA ,
15 kb, RNA, 8 - 20 ,
ORF5ORF6ORF7 1. 5 GP5
, ORF5 , PCR 25 L, cDNA 2. 0 L
[ 6]
, ORF6 ORF7 , 10 Buffer 2. 5 L, dNTP 2. 0 L, rTaq
ORF5, 0. 5 L, GP5F /GP5R 0. 5 L,
, 25 LGP5: 95 5 m in; 94 50 s, 58
PRR V 50 s, 72 60 s, 30; 72 10 m in
1 , 5 L PCR 1%
1. 1 1. 6
pMD 18- T,
DH5, ,
1. 2 LB, 37 ,
Trizol L Reagent, Invitrogen; BamH H ind ,
( AMV )RNA DNA M arkerrTaq
dNTPpMD 18- T BamH H ind 1. 7
, TaKaRa; DH5 BlastDNA tar
, , ,
1. 3
GenBankPRR V VR- 2332 2
, ORF5, 1 2. 1
表 1 引物序列
RNA, RT - PCR HLJ10HLJ48HLJ64
VR - 2332
( 5~ 3)
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