检测HIV1准种终点有限稀释PCR技术建立.pdfVIP

史堡捡坠医堂盘查；Q螋生2旦筮丝鲞筮!翅垦匦!』!然丛鲤：墅唑畦塑呈Q螋：坠!!：堕垒! ．临床实验诊断研究· 检测HIV．1准种的终点有限稀释PCR技术 的建立 陈伟烈唐小平唐漾波魏绍静 【摘要】 目的建立1种基于实时PCR的检测HIV·l准种的终点有限稀释PcR技术并评价其 应用价值。方法采用基于第2轮实时和常规PCR的多重有限稀释巢式PCR、终点PCR及测序等技 术对3例低病毒载量HIV．1感染者不同时间点PBMc中的HIv-1前病毒准种绷，基因c2．v3．c3区域 和g昭基因p17区域进行扩增和序列测定；序列经确证后进行系统进化树分析并对氨基酸序列进行 DNA拷贝数。结果3例患者所有随访时间点标本共进行 比对；用QuALITY程序计算HIV．1 l207个巢式实时PcR，从第二轮常规巢式PCR共获得65条c2-v3-c3准种序列、101条p17准种序 列；HIV一1前病毒水平介于1．34～53．76拷贝／106个PBMc之间。c2-v3一c3及p17核苷酸序列系统进 化树分析表明，不同患者的序列分开、同一患者的序列特异聚集在一起。氨基酸序列比对分析表明， HIV．1感染早期患者体内HIV—l准种序列比较单一，随着感染时间的增加，HIV一1准种趋于复杂化。 结论本研究建立的独特终点有限稀释PCR技术检测HIV·l准种灵敏度高、特异性好、高通量，可用 于低水平病毒载量HIV-l感染者HIV-l准种研究。 【关键词】 HIV—l；聚合酶链反应 EstaMishm蜘t PCR of柚蛐d·p0柚t吐Ini妇g-衄u廿onassay颤盯detecti明ofh啪粕i删帆uno嘲d蛐cy l 、rir吣ty|peq哪豳雕!ci鲻C脚1Ⅳ耽i-船，孤^临舡∞iP打w，黝^『G％帽·60，聊5‰和强加￡拓抛矿 ，n／娩f如淞D‘卵邯酷，Qmn辱zbu^h8脚J!e’s骨却如4，G∞n彩bu5jDDc，D，(冼i，m c0玳{PD础增。以b7：孤们舭D巾i昭，砌弛豇：耐口昭@2J饥com Toesblblishanovel to 【Abst阳ct】Obj佻廿ve end-pointlimitirIg-diluti仰PCR(EPLD·PCR)嬲8ay detecthum明 “邝s l 明d eval岫teits typle (HIV-1)qu鹊ispecies applicati帆 immunod胡ciency value．Methods nestedPCRb鹪e∞thesecondmIlnd realtime 1|le multiplexlimiting-dilution TaqMan PCR usedfordetectionof PCR(N—RT PCR，end—pointand鸵quencing PCR)and哪lar technolo彰were tlIe of c2-v3·c3 of3 HIV-l fbmthePBMCs seqIlence8 qIl鹊ispeci∞e聊generegion蛐dg昭genep17re百on HIV．1infected withlowlevelviraJload．AU ofc2-v3一c3明dwerecorIfi硼ed patient8 sequences p17 hy fornucleotide