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第34 卷 分析化学 （FENXI HUAXUE ） 研究报告 第4 期 2006 年4 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 443 ～ 446 用同步辐射X-荧光定量测定电泳分离后蛋白条带内的微量元素 1，2 1 1 1 1 1 # 董元兴 高愈希 陈春英 李 柏 邢 丽 喻宏伟 1 1 1 何 伟 黄宇营 柴之芳 1 （中国科学院高能物理研究所，北京 100049 ） 2 （忻州师范学院物理系，忻州034000 ） 摘 要 建立了同步辐射X-荧光（SRXRF ）定量测定生物样品等电聚焦（IEF ）分离后蛋白条带内的微量元素 Fe 、Cu 和Zn 的方法。用薄层聚丙烯酰胺凝胶分离人血红蛋白后，用SRXRF 测定了各亚型条带内的金属含 量，用加一定量金属的含蛋白聚丙烯酰胺凝胶做SRXRF 定量测定蛋白条带内微量元素Fe 、Cu 和Zn 的定量标 准，校准曲线线性回归系数r 在0 ～ 8 µg/ g 范围内均大于0 . 99 ；检出限分别为2 . 43 、1. 12 和0 . 96 µg/ g ；测定蛋 白条带内Fe 和Zn 的回收率分别为90 . 4 % 和115. 7 % 。该联用技术可用于生物样品中微量元素的化学形态 分析，同时给出蛋白质的微量元素组成和等电点等信息。 关键词 微量元素，形态分析，同步辐射X 荧光，电泳，金属蛋白 1 引 言 微量元素具有重要的生物学功能，体内约25% 的蛋白质为金属蛋白，50% ～ 70% 的酶中含有微量 元素。这些金属蛋白或酶在特定位点专一结合特定数量的金属离子作为其活性中心或结构中心以保持 这些蛋白的功能、结构和稳定性。微量元素正是通过各种各样的金属蛋白或金属酶来实现其主要的生 理生化功能，因而它们在生物体内的存在形态及分布直接影响其功能的发挥；另一方面，元素的生物可 利用性和毒性也取决于其化学形态，所以在生物学、医学、药学、食品、农业及环境等学科领域都迫切需 要对微量元素进行形态分析［1］。因为生物体内微量元素主要是与蛋白质结合的，其化学形态分析的主 要任务就是研究金属蛋白的分布。通常先将蛋白质提取并分离，然后测定各蛋白中的金属种类和含量。 因为生物样品的组成比较复杂，一个金属蛋白或亚基往往只含有一个或几个金属离子，所以研究的开展 有赖于高效、高分辨的蛋白质分离方法和高灵敏度的多元素分析方法。 X-荧光分析（XRF ）是一种多元素分析方法。用同步辐射（SR ）做XRF 的激发光源可使其相对检出 限达到10 ng/ g［2 ］，样品只需几 g 。该技术已被成功地用于各种病理组织和正常组织，甚至一个细胞中 µ 微量元素的测定，以了解疾病机理以及微量元素的生物化学行为［3 ～ 5 ］。本课题组曾采用SRXRF 直接测 定了人肝细胞胞质溶胶电泳分离后凝胶基体中各蛋白条带所含微量元素的相对含量［6 ～ 9 ］。但因缺乏合 适的标准物质而难以进行定量分析。本研究用加一定量金属的含蛋白聚丙烯酰胺凝胶膜作为SRXRF 测定蛋白条带内微量元素含量的定量标准，定量测定了人血红蛋白经过IEF 分离后各亚型条带内的微 量元素。 2 实验部分 2 . 1 试剂 人血红蛋白， Tris（Sigma 公司）；Acrylamide ，N ，N -Methylenebis-acrylamide （Biomol 公司）；载体两 性电解质 （pH 6 ～ 9 ）为中国军事医学科学院产品。其余试剂均为分析纯以上的国产试剂。所有溶液全 部使用经Milli-Q