应用SELDITOFMS技术分析清热解毒凉血化瘀对内毒素肝损伤大鼠蛋白质表达影响.pdfVIP

MEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011 VOL．22NO．7 时珍国医国药2011年第22卷第7期LISHIZHEN 应用SELDI—TOF—MS技术分析清热解毒凉血化瘀 对内毒素肝损伤大鼠蛋白质表达的影响 刘 鹏1，文海花2，王开正3，张囡囡4，胡琼英2，王杜娟5 5．泸州医学院硕士研究生2008级，四川泸州646000) 摘要：目的应用SELDI—TOF—Ms技术分析清热解毒凉血化瘀对内毒素肝损伤大鼠蛋白质表达的影响。方法采用腹 腔注射内毒素(LPS)复制内毒素肝损伤模型，大鼠随机分为正常对照组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组，用SELDI —TOF—MS技术分析大鼠血清差异表达蛋白。结果样品血清中共获得与芯片结合的11个有效蛋白质峰。其中相对分 984道尔顿、9005道尔顿的蛋白峰在 子质量为4200道尔顿的蛋白峰在中药干预组的血清中高表达，相对分子质量为8 中药干预组低表达。结论蛋白峰的变化，可能是清热解毒凉血化瘀中药干预内毒素肝损伤大鼠的重要的分子基础。各 组大鼠的血清内确实存在着差异表达蛋白，这可能有助于内毒素肝损伤的进一步研究。 关键词：清热解毒； 凉血化瘀； 内毒素血症；肝损伤；蛋白质组学 1．07．064 DOI标识：doi：10．3969／i．issn．1008-0805．201 中图分类号：R284．2文献标识码：B 文章编号：1008-0805(2011)07-1686也 6 近年来，内毒素与肝损伤的关系越来越受到学术界的重视。 血前禁食12h以上，饮水自由。注射LPSh后，用1％戊巴比妥 不少学者针对内毒索肝损伤热、毒、瘀的病因病机，用清热解毒凉 钠30rag／ks腹腔注射麻醉动物，酒精消毒皮肤，开胸，心脏取血， 血化瘀中药干预内毒素肝损伤取得了可喜疗效，但目前对其作用 机制的研究主要集中在调节细胞因子，调节免疫功能，改善微循 血清蛋白质谱，鲎试剂基质偶氮显色定量测定内毒素的含量，全 环，清除内毒素，抗脂质过氧化等方面。为这些治疗方法寻找更 自动生化仪测肝功酶学指标。③中药组大鼠分高低剂量组，分别 深层次的物质基础，特别是其对蛋白质谱的干预作用，是目前各 用20．40，5．10g／k浓度每天灌胃，连续7d，余实验方法同模型 科研工作者热点探讨的课题。本实验以清热解毒凉血化瘀中药 组。④正常对照组大鼠每天用蒸馏水2ml灌胃，连续7d，于末 灌胃干预内毒素肝损伤大鼠，用蛋白质芯片～飞行时间质谱技术 次灌胃Ih后腹腔注射等量蒸馏水，余实验方法同模型组。 2．2 (SELDI—TOF—MS技术)观察内毒素肝损伤大鼠血清中蛋白质 表达的变化，初步为临床从蛋白质层面了解内毒素肝损伤提供实 差异 000 验依据。 2．2．1血清样本的制备血液在40C环境下离心，3r／rain，离 000 心5 r／min，离 1器材 rain。取上清液加入eppendof管。再次离心3 ml 心5rain，0．5 m每管，放入一80℃ 1．I动物一级sD大鼠，雄性，体质量300g左右，由泸州医学