表柔比星对结肠癌SW480细胞生长影响的体外实验的研究.docVIP

表柔比星对结肠癌SW480细胞生长影响的体外实验研究 寇博1 王新阳1 郭鹏1 贺大林2(通讯）(1.西安交通大学第一附属医院泌尿外科研究所，陕西 西安 710061 2.西安交通大学第一附属医院泌尿外科，陕西 西安 710061) 摘要：结肠癌，属于威胁人类生命健康的恶性肿瘤的一种，占胃肠道肿瘤的第3位。其发生与发展与饮食结构、遗传、环境等多因素有关。在一些发达国家，其中75%~80%的病人已经得到了手术根治术及术后积极的辅助化疗。但通过随访过程中的效果评判来说，其5年生存率仅仅60%左右，其病死率并未得到明显的降低。现阶段的辅助化疗药物大部分以细胞毒性药物为主，不但对正常细胞有影响，且耐药现象逐渐显现。本实验通过观察表柔比星对结肠癌SW480细胞和结肠正常细胞生长影响，同时将其与目前临床常用化疗药对比，评价其抗癌性初步探讨其作用机制。 关键词：表柔比星；结肠癌；MTT; 1.研究背景 结肠癌，属于威胁人类生命健康的恶性肿瘤的一种，好发部位为直肠及直肠与乙状结肠交界处，占胃肠道肿瘤的第3位。其发生与发展与饮食结构、遗传、环境等多因素有关。在世界恶性肿瘤发病率中已经上升到第三位,位居以恶性肿瘤为死因疾病的第二位。发病多在40岁以后，男女之比为2~3：1。以40岁～50岁年龄组发病率最高。据世界流行病学调查，发现结肠癌在北美、西欧、澳大利亚、新西兰等地的发病率最高，居内脏种瘤前二位，近年来随着我国国民生活习惯饮食习惯及环境的改变，发病率呈逐年上升趋势。在我国,十年前，结肠癌的死亡率约为恶性肿瘤死亡率的第六位，现在结肠癌死亡率已经达到了第四位,已然成为了危害人类健康的重要疾病[1-5]。其发病隐匿，死亡率高等特征使其的早期诊断，积极综合治疗成为了医学界的较为棘手的问题之一。 2. 材料和方法 2.1实验材料 2.1.1实验对象 人结肠癌SW480细胞株 由西安交通大学中心实验室保存 人结肠正常上皮细胞株 由西安交通大学中心实验室保存 2.1.2实验试剂 表柔比星 天津辉瑞制药有限公司 奥沙利铂 赛诺菲民生制药厂 氟苷 浙江海正药业股份有限公司 合成活性多肽P2 上海波泰生物科技有限公司 DMEM高糖培养液 赛默飞世尔生物化学制品（北京） 有限公司 新生胎牛血清 兰州民海生物 胰酶 Invitrogen公司 青霉素 杭州民生药业集团有限公司? 链霉素 大连美罗药业股份有限公司 四甲基偶氮唑盐（MTT） 美国Sigma公司 二甲基亚砜（DMSO） 美国Sigma公司 碘化丙盯（PI） 美国Sigma公司 2.2实验分步及分组 实验有MTT实验及细胞周期和细胞凋亡实验，分为结肠癌SW480细胞组和结肠正常上皮细胞组。每一组再分为空白对照组和不同药物不同浓度干预组，其中药物干预组在MTT实验中所用药物为:表柔比星、奥沙利铂、及氟苷，其摩尔浓度梯度为0.04、0.08、0.16、0.32mmol/l；相互联合用药浓度为：0.04、0.16 mmol/l。细胞周期及细胞凋亡实验均只使用结肠癌SW480细胞株，根据MTT实验结果的IC50值分为4组，一组为空白对照组，其余3组均为0.08、0.16、0.32mmol/l的表柔比星处理过的结肠癌SW480细胞。 2.3统计学处理 以上实验均重复3次，计量资料以均数±标准差（X+S）表示，用统计软件SPSS17.0进行数据处理，多组间比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）,组内两两比较采用独立样本T检验，以а=0.05为检验标准。 3结果 3.药物对细胞的增殖抑制—MTT实验结果 实验中采用在48H时间点及摩尔浓度梯度处理后的情况下观察表柔比星与及其联合用药的作用强度比较。在干预时间（48h）各单药均随浓度梯增（0.02 mmol/l、0.04mmol/l、0.08 mmol/l、0.16 mmol/l、0.32 mmol/l）的增加, 各