戊肝诊断试剂在医院及疾控的应用.ppt

戊肝诊断试剂在医院及疾控的应用 北京万泰生物药业股份有限公司 技术工程师 崔伟 一、戊型肝炎相关概念及特点 戊型肝炎由戊型肝炎病毒（HEV）引起，HEV是单股正链RNA病毒,属于嗜肝病毒科.约占临床散发型肝炎的15－20%，戊肝在病毒性肝炎中病死率最高，孕妇病死率可高达20%。 传播途径:主要经胃肠道传播，常通过水源和食源暴发或流行,丙球蛋白免疫无效 临床症状:厌食、乏力、恶心、巩膜黄染、右上腹部不适、呕吐、肝脏肿大等.其临床症状与甲肝类似。 戊肝不同临床阶段的HEV感染指标 HEV-IgM是良好的近期感染标志物 戊肝病程中各感染指标的变化过程清楚显示，HEV-IgM抗体是一个良好的戊肝病毒近期感染指标。 二.优良的诊断试剂是检测结果准确可靠的保证 关键: 构象抗原 现有试剂以线性表位为主的重组蛋白或合成肽作为抗原，未能模拟出HEV最主要的构象依赖性抗原表位。 优质的抗原是检测试剂的关键!!! 2.1 HEV基因 试剂的关键E2抗原的发现及其特征 1998年，用大肠杆菌表达HEV结构蛋白ORF2的一个片段(E2)时发现，该蛋白可以自发形成二聚体，并且二聚体蛋白对戊肝恢复期血清有极强的反应性，这一反应性随着二聚体的解聚而消失 。 E2抗原反应性：对戊肝急性期血清和多年后的恢复期血清有明显的反应，恢复期血清的反应性集中在二聚体上。 2.2 具有动物模型的诊断试剂(恒河猴HEV感染模型) 献血员中HEV检测：E2-IgM(+)、 E2-IgG(-) 、GL-IgM和IgG均(-)的献血员206血清HEV RNA基因分型 206血清可感染猴子 三.HEV ELISA 试剂 与 临床急性肝炎诊断 3.1 人们对戊型肝炎的重视逐渐增强 新的《中华人民共和国食品安全法实施条例》实施条例对食品安全法中较为原则的制度作了具体规定 ：食品从业者应按章检查戊型病毒型肝炎和甲型病毒性肝炎，同时取消乙肝的检测。员工入职新生入校等健康体检也取消了乙肝的检测项目。 食品从业人员的健康体检 新试行条例规定食品从业人员的健康体检取消了HBV的检测项目，新增了HAV-M和HEV-M两种检测项目。IgM抗体的检测目的主要是避免近期感染对食品安全的威胁。（包括显性感染和隐性感染） 颁布了《戊型病毒性肝炎诊疗规范》，用以明确HEV的诊断及治疗。人们对戊型肝炎的重视逐渐增强。 3.2 万泰HEV试剂与其他国内外厂家的试剂比较 3.2.1灵敏度和特异度综合评价 复旦大学公共卫生学院 E2 IgM与GL IgM在急性肝炎中检出符合情况 临床阴转血清的评价 －新疆戊肝感染10年后血清抗HEV抗体检出 3.2.2实验室数据 3.2.3实验室数据 HEV的诊断指标(依据戊型病毒性肝炎诊疗规范） HEV-M抗体阳性 HEV-G 抗体阳转或者浓度四倍以上升高 HEV –PCR 阳性 以上标准符合其一即可作为戊肝诊断的指标，同时满足两项即可确诊。通常HEV-M阳性且HEV-G阳性即可诊断（个别情况需动态观察）。 *中华临床感染病杂志２００９年１０月第２卷第５期 * * + - - - 既往感染 + + - - 戊肝恢复期 + + + - 近期隐性感染 + + + + 戊肝急性期 IgG IgM RNA ALT 临床阶段 优质的抗原是检测试剂的关键！ ORF1主要编码与病毒RNA复制有关的非结构蛋白， ORF2为HEV的主要结构基因编码区,编码病毒衣壳蛋白， ORF3基因编码产物pORF3为磷蛋白。 Western Blot (See: J Med Virol, 2001,64:125-132) 单体 二聚体 SDS急性期血清(10例) 恢复期血清(8例) 二聚体E2 单 体E2 感染时间（周） F9 HEV感染、发病与抗体发生过程 感染时间（周） N2 HEV感染、发病与抗体发生过程 感染时间（周） F4 HEV感染、发病与抗体发生过程 I型 IV型 IV型 II型 III型 52 78 构象性表位 线性表位 猴HEV感染过程中各项指标消长分析 79.6 93.8 45/48 85.4 233/273 GL IgG 69.6 72.9 35/48 96.7 264/273 GL IgM 97.9 97.9 47/48 100.0 273/273 WT IgM 灵敏度 （%） 阳性数 /检测数 特异度 （%） 阴性数/ 检测数 约登指数(%) 急性戊肝 正常人群 指标 119 62 57 Total 90 62 28 - 29 0 29